摘要: 采用C636细胞培养分离活病毒、间接免疫荧光染色检测病毒抗原、RTPCR扩增病毒基因片段和PCR产物测序等方法,对实验感染的三带喙库蚊Culextritaeniorhynchus和来亨鸡血液样本中的西尼罗病毒进行分离和鉴定。结果表明,接种实验感染蚊虫研磨液和来亨鸡血液样本的C636细胞出现细胞融合、空泡形成的病变效应;用西尼罗病毒抗血清进行间接免疫荧光染色,感染病毒的细胞呈现黄绿色荧光,为阳性反应;采用3对不同引物的RTPCR体系扩增分别出现预期的408bp、498bp和559bp的基因片段,序列测定证实扩增序列与实验所用毒株相应的基因序列基本相同。从而证实实验感染三带喙库蚊和来亨鸡体血液内的西尼罗病毒与实验感染所用的西尼罗病毒Chin01株一致。

摘要: 本研究建立了西方马脑炎病毒的RT-PCR检测方法,应用于实验感染西方马脑炎病毒的来亨鸡血液及蚊虫样本中的病毒核酸检测。结果从感染病毒的来亨鸡血液及蚊虫样本中均能扩增出与预期分子量一致的特异性条带,经序列测定证明,与西方马脑炎71V-1658(NC-003908)病毒株核酸序列有较高的同源性。表明所建立的RT-PCR检测方法能够快速敏感地检测出实验感染来亨鸡血液样本及蚊虫体内西方马脑炎病毒。

摘要: 根据已发表的西尼罗病毒Chin-01株基因序列,参照文献资料选择合成一对引物,建立西尼罗病毒的RT-PCR检测方法,对反应条件进行了系列优化后,应用于感染蚊虫样本及来亨鸡血液样本中的病毒核酸检测。该方法的检测敏感性达到1·0PFU,感染蚊虫样本和来亨鸡血液样本均能够扩增出与预期值大小一致的特异性区带,经序列测定证明,与实验感染所用病毒株序列完全相同。可见RT-PCR是检测实验感染蚊虫和来亨鸡体内西尼罗病毒行之有效的方法。