摘要: 采用组织学和电镜技术对曼氏无针乌贼的墨囊及墨腺细胞进行了研究。结果表明:墨囊壁和导管壁由外膜、肌肉层和黏膜三部分组成;墨腺体集中在墨囊底部,呈索状,腺体中部含丰富的结缔组织;墨汁颗粒以游离态形式分布于索状腺体的间隙及墨囊腔中。实验观察到无分泌黑色素功能的A型细胞和有分泌黑色素功能的B型细胞;在B型细胞中可见黑色素颗粒储存在囊泡中,囊泡在移出细胞的过程中逐渐变大,泡内的黑色素颗粒逐渐变多。囊泡可能通过胞吐的方式排出细胞外,黑色素排出后以颗粒的形式游离于细胞间隙中,形成墨汁。

摘要: 以曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)为研究对象,通过绝对定量技术建立和优化了舟山近海高浊度水样环境DNA(Environmental DNA, eDNA)的获取方法。研究结果如下:(1)同体积水样采用乙醇沉淀法获得的eDNA产量是滤膜抽滤法的1.76—2.53倍,但在实际应用中由于受到采样体积、处理方式、配套设备的限制,乙醇沉淀法难以发挥出优势;(2)滤网对泥沙等杂质无过滤作用,添加滤网并不能过滤掉泥沙及增加抽滤体积;(3)滤膜孔径的大小对少量水样的eDNA产量有很大影响,但对大体积水样eDNA的产量无影响;(4)水样静置处理有可能会增大eDNA产量,但也有可能会增大eDNA结果的波动性,使生物量评估结果误差较大;(5)阳离子表面活性剂对eDNA降解有明显的抑制作用;(6)去膜法效果优于碎膜法,建议使用去膜法进行eDNA消化,使用时增加离心时间;(7)酚抽除沙法虽然不能提高eDNA产量,但能明显提高产物纯度。研究首次建立了舟山近海水样大生物eDNA最适获取方法,为相似水域的水样采集及eDNA提取提供了借鉴参考。

摘要: 为研究曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)小心激肽(small cardioactive peptides, sCAP)生理功能,通过RACE技术克隆曼氏无针乌贼sCAP基因(简称SjsCAP, GenBank登录号:MG779491),得到总长度为696 bp的cDNA序列,包括111 bp的5′非编码区(UTR)和324 bp的3′UTR,预测的开放阅读框(ORF)共261 bp,编码86个氨基酸,相对分子量(MW)为9.331 kD,等电点(pI)为8.52。信号肽以及跨膜区预测结果表明, sCAP中含有明显的信号肽序列和跨膜区结构。因此,推测该蛋白可能由细胞内分泌到细胞外发挥作用。亲水性分析显示该蛋白为亲水性蛋白。基于sCAP氨基酸序列进行的系统进化分析表明曼氏无针乌贼与商乌贼(Sepia officinalis)亲缘关系最近,相似性达到90%。通过荧光定量PCR (Quantitative real-time PCR, qRT-PCR)技术对Sjs CAP基因在成熟雄性和雌性曼氏无针乌贼不同组织中的表达量进行分析,结果显示sCAP主要在视叶中显著表达,在脑中也有较高的表达量,其中雄性个体表达量显著高于雌性个体。原位杂交实验结果显示sCAP基因在曼氏无针乌贼的脑组织的视叶、食道上神经团的垂直叶、亚垂直、脑脚叶、背外侧叶和视腺均可以观察到明显的阳性杂交信号。sCAP基因的成功克隆以及组织表达定位分析为sCAP的亚细胞定位以及生物学功能研究奠定一定的基础,同时为曼氏无针乌贼的种质资源保护与开发提供一定的理论支持。

摘要: 研究设计了曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)的特异性引物和TaqMan探针,采用eDNA方法对东海海域44个站位的175个水层样品进行了曼氏无针乌贼的水平(44个站位)和垂直分布(175份水样)分析,并进行了曼氏无针乌贼e DNA与环境变量(总深度、采样深度、温度、盐度、溶氧量、浊度、叶绿素、■)的相关性分析。结果显示,在调查海域曼氏无针乌贼的eDNA检出率为17.14%,在各站位间无显著差异,但在垂直分布上有显著差异(P<0.05)。在中表层水中检测到较高的曼氏无针乌贼eDNA浓度,在深度大于81 m的海水中未检测到曼氏无针乌贼eDNA。此外,曼氏无针乌贼的eDNA浓度(Ln([eDNA]+1))和存在/不存在(YNeDNA)受总深度、浊度、盐度、溶氧量、■等环境变量的影响。研究证明了eDNA是一种可靠的物种调查方法,可以作为传统资源调查的补充,为进一步研究东海海域曼氏无针乌贼的资源分布及栖息地选择提供技术支持,并为其资源修复和可持续利用提供参考依据。