摘要: 本研究构建日本血吸虫2 6kDa谷胱苷肽转移酶(Sj2 6 )基因的真核表达重组质粒(pcDNA3 Sj2 6 ) ,并探讨其在树突状细胞(DC)中的表达。采用PCR扩增Sj2 6基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNA3中,阳性克隆经双酶切、PCR扩增鉴定后,双脱氧链末端终止法进行序列测定。用脂质体介导DNA转染法将pcDNA3- Sj2 6转染DC ,G4 18加压筛选获得阳性克隆并传代培养,用RT PCR检测Sj2 6mRNA的转录水平,用SDS- PAGE、Westernblot和间接免疫荧光法检测Sj2 6蛋白在DC中的表达。结果PCR扩增得到特异的Sj2 6基因片段,双酶切及PCR鉴定表明获得正确的pcDNA3 -Sj2 6重组质粒;测序结果表明,核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank报道的Sj2 6的一致性均为99% ;RT PCR结果显示pcDNA3- Sj2 6转染的DC中有Sj2 6基因mRNA的表达,SDS -PAGE和Westernblot、间接免疫荧光法显示pcDNA3- Sj2 6转染的DC中有Sj2 6的表达。结果证实构建的真核表达重组质粒pcDNA3- Sj2 6成功的转染至DC中并在DC中获得表达。

摘要: 目的 :观察已构建日本血吸虫大陆株 31kDa组织蛋白酶BDNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31及VR1 0 1 2 SjGST Sj31在BALB c小鼠体内的免疫保护效果。方法 :用纯化的空白质粒载体VR1 0 1 2、重组质粒VR1 0 1 2 Sj31及VR1 0 1 2 SjGST Sj31于股四头肌注射免疫BALB c鼠 :将 36只 6～ 8周龄BALB c鼠随机分为 3组 ,每组 1 2只 ,对照组 (A组 )注射空白质粒载体VR1 0 1 2 ,B组注射重组质粒VR1 0 1 2 Sj31 ,C组注射重组质粒VR1 0 1 2 SjGST Sj31。质粒剂量均为 1 0 0 μg ,每隔 2周免疫 1次 ,共免疫 3次 ,第 3次免疫后第 2 1天 ,每只鼠经腹部感染 1 0条尾蚴 ,4 2天后剖杀计数各小鼠成虫数和每克肝卵数 ,观察诱导产生的减虫和减卵效果 ,并用ELISA分析小鼠血清中的抗体。结果 :ELISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性IgG抗体。与空白质粒对照组比较 ,2个实验组的减虫率分别为 2 5 0 %及 30 0 % (P <0 0 5 ) ,肝组织减卵率分别为 5 4 90 %及 6 9 74 % (P <0 0 0 1 ) ,每雌肝减卵率分别为 4 7 96 %、5 4 6 2 % (P <0 0 0 1 )。与B组相比 ,C组的肝组织减卵率为 32 92 % (P <0 0 0 1 ) ,每雌肝减卵率为 1 2 79% (P <0 0 5 )。结论 :DNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31和VR1 0 1 2 SjGST Sj31能诱导小鼠产生一定水平的抗

摘要: 用Southernblotting ,Northernblotting技术对所克隆的日本血吸虫抱雌沟蛋白编码基因SjGcp进行了性别和时期差异表达研究。结果显示日本血吸虫抱雌沟蛋白基因为雄虫特异性表达基因 ,在感染后第 14天即雌雄虫将合抱前可见转录表达

摘要: 目的 :探讨中国日本血吸虫的遗传变异及相互进化关系。方法 :采用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对中国大陆及台湾不同地域的日本血吸虫进行RAPD扩增 ,计算地域株间的遗传距离 ,并以非加权配对聚类分析 (UPGMA)法绘制中国日本血吸虫的聚类图。结果 :中国大陆与台湾各聚一类 ;大陆的四川山区与湘、鄂、赣湖区分别聚为一类 ;湖区的湖北武汉、湖北钟祥与湖南岳阳聚为一类 ,湖北阳新与江西新建聚为一类 ,湖北松滋自成一类。结论 :中国日本血吸虫亲缘关系密切 ,存在共同的起源 ,同时在基因型上存在不同程度的遗传分化 ,分化的程度同地理生态环境差异相关

摘要: 采用饱和硫酸铵沉淀法及凝胶过滤法从感染兔血清 (InRS)和免疫兔血清 (ImRS)中纯化出IgG抗体 ,分别经过SDS PAGE鉴定其纯度及对流免疫试验、免疫双扩散试验鉴定其活性和效价 ,以便制成一种新型的液相压电免疫传感器 ,用于检测兔与病人血清中的日本血吸虫循环抗原 (SjCAg)。初步应用该法检测了不同感染度的兔血清 ,发现频移值变化在一定范围内与感染度成正比。