摘要: 为优化抗旋毛虫病核酸疫苗免疫策略,本文探讨了Ts87 DNA疫苗滴鼻初免与蛋白疫苗皮下注射加强免疫诱导产生的保护效果及免疫应答特征。分别在第0 d以旋毛虫Ts87 DNA疫苗SL7207/pVAX1-Ts87滴鼻初免,第14/28 d以蛋白疫苗r Ts87皮下注射加强免疫小鼠,在第35 d攻击感染旋毛虫肌幼虫,第84 d剖杀小鼠,计算减虫率观察免疫保护效果;进行小鼠血清中特异性Ig G抗体效价、抗体亚型分析及肠道盥洗液s Ig A水平分析,检测脾淋巴细胞增殖反应、脾及颈部淋巴结细胞分泌细胞因子水平。结果显示,DNA疫苗滴鼻初免—重组蛋白加强的联合免疫组的保护作用优于单独DNA疫苗滴鼻及单独重组蛋白免疫组,显著提高了减虫率(46.1%);DNA疫苗滴鼻初免和蛋白疫苗加强免疫方式不仅诱导小鼠产生了粘膜免疫应答,同时也诱导了有效的细胞和体液免疫应答,其免疫应答类型是以Th2型为主的混合型Th1/Th2免疫反应。该研究为新型抗旋毛虫病疫苗接种策略的优化提供了实验依据。

摘要: 观察旋毛虫感染的不同阶段对小鼠胶原诱导性关节炎(Collagen-Ⅱinduced arthritis,CIA)的影响并初步探讨其机制。建立雄性DBA/1小鼠胶原(CⅡ)诱导性关节炎(CIA)模型,以旋毛虫肌幼虫(400条/只)分别于造模前14 d、造模当天感染小鼠。关节评分评价足爪关节病变的发生及严重程度。于胶原首次诱导后第50 d处死小鼠,取足爪关节切片观察组织病理学变化;ELISA检测血清抗CⅡ特异性Ig G、Ig G1、Ig G2a水平;分离脾淋巴细胞以Con A刺激培养,ELISA检测培养上清中IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17和TNF-α细胞因子水平。结果显示,与单纯CIA造模组相比,预先14 d感染旋毛虫的CIA小鼠关节炎发病率、关节评分及组织学评分均显著降低,血清Ig G1水平则显著升高,脾细胞培养上清Th2型细胞因子IL-4和调节性细胞因子IL-10水平显著增加。而造模当天感染旋毛虫的CIA小鼠关节评分和组织学评分显著升高,血清Ig G2a水平显著升高,细胞培养上清Th1型细胞因子IFN-γ和促炎细胞因子IL-17、TNF-α水平显著升高,且差异具有统计学意义。该结果表明,旋毛虫感染早期可加重胶原诱导性小鼠关节炎,而感染后期则对关节炎有一定抑制作用,提示旋毛虫对小鼠胶原诱导性关节炎的影响作用因感染时限的不同而存在差异,且该差异可能与不同感染时期诱导的Th反应类型的变化有关。

摘要: 本文构建并表达了旋毛虫热休克蛋白70(Ts-Hsp70)与排泄分泌抗原Ts87的融合蛋白,并对融合蛋白进行纯化和免疫学鉴定。本研究采用限制性内切酶EcoRⅠ酶切位点将目的基因Ts-Hsp70与Ts87相连接,插入p ET28-a(+)质粒,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达、纯化,获得的融合蛋白r Ts-Hsp70-Ts87用Western blot的方法鉴定。经PCR、酶切鉴定、测序分析,结果显示,目的基因片段大小为2 721bp,构建的重组质粒与预期相符。经IPTG诱导表达,通过镍离子柱层析纯化复性后得到可溶的融合蛋白r Ts-Hsp70-Ts87,其相对分子质量约为100 k Da;Western blot结果显示,该蛋白可被抗His标签单抗、r TsHsp70免疫血清、r Ts87免疫血清识别。以上结果表明,本研究成功构建并表达了融合蛋白r Ts-Hsp70-Ts87,为进一步研究r Ts-Hsp70-Ts87的免疫保护性,开发新的有效抗旋毛虫病的疫苗奠定基础。

摘要: 我国云南猪体旋毛虫分离株（ＢＳ）经随意扩增的多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）方法产生的２５４ｂｐ条带，以地高辛（ｄｉｇｏｘ－ｉｎｉｎ）标记制成探针（Ｔｓ２５４），将此探针与７株旋毛虫总ＤＮＡ进行斑点杂交，出现明显的杂交斑点，检出的ＤＮＡ量为１ｎｇ。但与其它相关寄生虫、质粒ｐＢＲ３２２、昆明株小鼠肌肉ＤＮＡ均未出现杂交反应，表明Ｔｓ２５４探针具有一定的特异性和较高的敏感性。将此Ｔｓ２５４ＤＮＡ片段克隆进Ｍ１３ｍｐ１８／１９噬菌体，扩增后，筛选阳性重组子，抽提单链后测序。经Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ序列数据库检索，Ｔｓ２５４序列与真核ＤＮＡ及结构ＲＮＡ序列无有意义的同源性，此旋毛虫ＤＮＡ序列为我国首次报道。

摘要: 对我国７株旋毛虫基因组ＤＮＡ，采用５种限制性内切酶分析表明，来自猪体的旋毛虫酶谱相似，来自犬、猫体的旋毛虫酶谱相似，而猪体与犬、猫体的旋毛虫酶谱差异明显。同时采用随意扩增的多态ＤＮＡ分析，引物为：５＇ＡＡＴＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＧＴＣＧＡＣ３＇，各分离株显示自己特有带型。比较不同地区猪体或犬、猫体的旋毛虫及同一地区不同宿主的旋毛虫的相似率。提示：地区差异愈大，相似率愈小；宿主亲缘愈远，其相似率愈小。似乎我国旋毛虫可分为两群：一群是猪体旋毛虫，另一群是犬、猫体旋毛虫。