摘要: 为探讨程序性死亡分子1（programmed death-1,PD-1）对旋毛虫感染小鼠组织病理学改变的影响,以旋毛虫肌幼虫（400条/只）分别感染C57BL/6遗传背景野生（WT）小鼠和PD-1基因缺失(PD-1^-/-,KO)小鼠。于感染后第6 d取小鼠肠组织,第28、42、60 d取膈肌组织切片,HE染色观察组织病理学变化;感染后第60 d取膈肌组织Masson染色观察囊包周围肌组织纤维化水平。HE染色结果显示,感染后第6 d WT小鼠和PD-1^-/-小鼠肠组织肠绒毛长度/隐窝的长度（V/C）的比值和炎症细胞浸润数量均无显著差异（P> 0.05）;在感染后第28、42和60 d, PD-1^-/-小鼠肌组织中单位视野幼虫囊包数和炎症细胞浸润数量在各时间点均显著高于WT小鼠,且随感染时间延长,两组小鼠肌组织中炎症细胞数量均呈下降趋势。Masson染色结果显示,感染第60 d WT小鼠单个囊包周围组织纤维化面积明显高于PD-1^-/-小鼠。上述结果表明,PD-1对旋毛虫感染肠型期肠组织免疫病理反应无显著影响,但对肌型期幼虫在肌肉的寄生以及肌组织炎症反应具有抑制作用,并对修复期幼虫囊包周围组织纤维化具有促进作用。本研究为阐明PD-1在旋毛虫感染所致宿主组织病理损伤中的调节作用提供了实验证据。

摘要: 寄生蠕虫能否通过调节宿主肠道菌群进而改善炎症性疾病是近年的研究热点。为探讨旋毛虫感染对胶原诱导性关节炎(Collagen-Ⅱinduced arthritis,CIA)小鼠肠道菌群构成和丰度的影响,将15只小鼠随机分为正常对照组、关节炎(CIA)组和预先感染旋毛虫关节炎(CIA.TS)组,在首次胶原诱导后第50 d,取小鼠粪便进行16S rDNA测序,然后将CIA组和对照组之间的差异菌属与关节炎评分进行Spearman相关分析。结果显示,与对照组相比,CIA组小鼠菌群结构发生了明显的改变,其丰富度和多样性有上升趋势;在门水平上,脱铁杆菌门、变形菌门和梭杆菌门的丰度明显增加;在属水平上,未分类毛螺菌科、Mucispirillum属和脱硫弧菌属的丰度明显增加,Alistipes属和理研菌属的丰度明显减少。CIA组小鼠中丰度显著升高的菌属,其相对丰度与关节炎评分呈正相关;而丰度显著降低的菌属,其相对丰度与关节炎评分呈负相关。与CIA组相比,预先感染旋毛虫的关节炎小鼠(CIA.TS)菌群的丰富度和多样性有下降趋势,脱铁杆菌门和变形菌门的丰度明显减少,Mucispirillum属和脱硫弧菌属的丰度明显减少,理研菌属的丰度明显增加。以上结果表明,CIA小鼠肠道菌群结构改变与关节炎疾病严重程度密切相关,而预先感染旋毛虫可缓解CIA小鼠的关节炎症,其改善作用可能与调节CIA小鼠肠道菌群结构有关。

摘要: 探讨PD-1信号通路在旋毛虫感染影响卡介苗（Mycobacterium bovis bacille Calmette-Gu'erin,BCG）免疫小鼠细胞因子产生中的作用。首先,以旋毛虫肌幼虫（400条/只）分别感染C57BL/6遗传背景野生（WT）小鼠和PD-1基因缺失(PD-1^-/-)小鼠,于感染后42 d处死小鼠,分离脾淋巴细胞以刀豆蛋白A（Concanavalin A,ConA）刺激培养48 h,ELISA检测培养上清中Th1型IFN-γ、IL-2、TNF-α,Th2型IL-4,和调节性TGF-β、IL-10细胞因子水平;进而,在上述相同感染条件下,于感染后28 d接种BCG,分别于免疫后7和28 d分离WT小鼠和PD-1^-/-小鼠的脾淋巴细胞,用卡介菌纯蛋白衍生物（purified protein derivative,PPD）体外刺激培养48 h,ELISA检测细胞培养上清中上述细胞因子分泌水平。结果显示,在单纯旋毛虫感染及感染后BCG免疫条件下,各细胞因子变化趋势趋于一致。WT小鼠感染组Th1型IFN-γ、IL-2水平明显低于未感染组,Th2型IL-4及调节性TGF-β、IL-10水平明显高于未感染组（P<0.05）,TNF-α水平无显著差异。而PD-1^-/-小鼠中,与未感染组相比,感染组Th1型IFN-γ、IL-2和TNF-α的下降水平,以及Th2型IL-4和调节性TGF-β、IL-10的上升水平较WT小鼠明显减小。上述结果表明,旋毛虫感染可经PD-1信号通路抑制BCG免疫诱导的Th1型细胞因子的产生,而促进Th2型细胞因子IL-4及调节性细胞因子的IL-10和TGF-β的生成。本研究为蠕虫感染抑制抗结核疫苗保护性效果的潜在机制提供了实验依据。

摘要: 为研究旋毛虫感染的致病机制,探讨旋毛虫钙网蛋白对补体凝集素途径活化的影响,本文首先通过ELISA和Far western blot方法检测重组旋毛虫钙网蛋白(recombinant Trichinella spiralis calreticulin,rTs-CRT)与甘露糖结合凝集素(mannose binding lectin,MBL)的相互作用情况,随后采用ELISA法研究rTs-CRT对血清中的MBL以及重组MBL分子与甘露糖的结合的抑制作用,最后,研究这种抑制效果是否会抑制补体凝聚素途径的活化。ELISA及Far western blot结果证实rTs-CRT可结合MBL分子,且二者的结合可抑制血清以及重组MBL分子结合甘露糖。同时,这种抑制作用会减弱补体凝集素途径活化后C4b的沉积。结果表明,rTs-CRT可通过结合补体MBL抑制其识别甘露糖,进而减弱补体凝集素途径的活化。

摘要: 利用Baculo Direct昆虫杆状病毒表达系统表达重组旋毛虫副肌球蛋白(recombinant Trichinella spiralis paramyosin,r Ts Pmy),以获得生物学活性较好的重组蛋白。通过PCR和DNA重组方法构建含Ts Pmy基因的Gateway入门载体重组质粒p DONR221(p DONR221/Ts Pmy),经测序鉴定后,扩增重组质粒;利用重组质粒p DONR221/Ts Pmy和Baculo Direct线性杆状病毒进行Gateway DNA重组反应,构建重组病毒,用其直接感染昆虫细胞Sf9使得重组病毒具有感染活力;连续感染Sf9以扩增病毒,利用滴度较高的病毒感染Sf9进行r Ts Pmy表达;SDS-PAGE及Western blotting分析鉴定表达的重组蛋白r Ts Pmy。结果显示,重组质粒经测序鉴定显示序列正确;SDS-PAGE及Western blotting显示r Ts Pmy分子量大小约110 k Da,未见不完全表达;可溶性分析显示r Ts Pmy部分可溶,大部分为不可溶沉淀;Western blotting结果显示r Ts Pmy可被旋毛虫感染的小鼠和猪抗血清识别,具有抗原特异性。本研究首次利用Baculo Direct昆虫杆状病毒表达系统成功表达了r Ts Pmy,获得翻译后修饰更加完善、纯化效果更好的重组蛋白,对于进一步研究Ts Pmy的功能,为制备有效的旋毛虫病疫苗候选抗原分子提供了生物学基础。