摘要: 为了明确斜纹夜蛾Spodoptera litura对溴氰菊酯产生抗性的分子机理,本研究利用RT-PCR技术和RACE方法获得了1个斜纹夜蛾羧酸酯酶基因的全长cDNA序列,命名为Slest2。序列分析表明,该cDNA全长1796bp(GenBank登录号:DQ445461),5′和3′UTR区分别长63和119bp,开放阅读框编码一个由537个氨基酸残基组成的羧酸酯酶蛋白。通过对氨基酸同源性分析表明,该羧酸酯酶与其他物种的酯酶均具有很高的氨基酸相似性,并具有多个在不同酯酶蛋白家族中均保守的区域。采用实时定量PCR技术比较了Slest2在斜纹夜蛾抗、感品系中的表达水平。当以cDNA为模板检测mRNA转录水平时发现,Slest2在抗性品系中的转录水平是敏感品系的46.85倍;以基因组DNA为模板检测Slest2基因的拷贝数时发现,Slest2在抗、感性品系中的拷贝数无显著差异(前者为后者的1.16倍)。这些结果表明,抗性与敏感品系具有相似的Slest2基因拷贝数,但它们在抗性品系中的转录水平显著升高。由此推测Slest2基因的转录水平升高与斜纹夜蛾对溴氰菊酯的抗药性密切相关。

摘要: 为提高现有性信息素对雄蛾的引诱活性,本研究通过大量的田间试验探索植物气味化合物与斜纹夜蛾Spodoptera litura性信息素(顺9,反11-十四碳二烯乙酸酯∶顺9,反12-十四碳二烯乙酸酯=10∶1)的协同作用机制。从斜纹夜蛾寄主植物和花的气味化合物中,选择9种有代表性的化合物,并以一定剂量分别加入到斜纹夜蛾性信息素诱芯中,在田间测试对雄蛾的引诱活性。结果表明:在测试的9种植源性化合物中,发现一定剂量(每个诱芯加入0.4mg)的苯乙醛(PAA),具有显著提高斜纹夜蛾性信息素的引诱作用,而高剂量的苯乙醛则强烈抑制性信息素的引诱活性;此外,其他各种浓度的测试化合物或混合物对性信息素则没有统计上显著的增效作用。不同剂量的苯乙醛单个化合物及各种植物气味化合物组成的混合物对斜纹夜蛾也有微弱的引诱作用。苯乙醛必须要与性信息素的完整组分(以10∶1比例混合的顺9,反11-十四碳二烯乙酸酯和顺9反,12-十四碳二烯乙酸酯)混合才能起作用,缺少顺9,反12-十四碳二烯乙酸酯则没有引诱活性。本研究证明,苯乙醛作为理想的性信息素诱芯增效剂,可应用于建立更理想的斜纹夜蛾性信息素诱杀技术,对性诱害虫防治和测报具有应用价值。

摘要: 为探讨斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)对氯氟氰菊酯抗性水平与解毒代谢酶之间的关系,以泰安郊区对氯氟氰菊酯抗性为543.7倍的斜纹夜蛾田间种群为材料,研究了药剂汰选与否的抗性动态及不同抗性水平的解毒代谢酶活性变化。结果表明:室内继代饲养至第30代,不接触任何药剂的抗性下降至102.3倍,用氯氟氰菊酯汰选28代后,抗性上升到3049.3倍,而在药剂汰选至第14代,抗性已至2593.8倍时,停止用氯氟氰菊酯汰选,到第30代的抗性又降至786.3倍。表明斜纹夜蛾抗氯氟氰菊酯田间种群,在无药剂选择压力时抗性水平会显著下降,继续给予药剂汰选会使抗性水平显著上升。检测斜纹夜蛾田间种群5龄幼虫中肠酯酶和谷胱甘肽S-转移酶活性,发现与敏感种群有显著性差异,而多功能氧化酶O-脱甲基活性与敏感种群的差异不明显;给予氯氟氰菊酯药剂汰选,酯酶、谷胱甘肽S-转移酶和多功能氧化酶O-脱甲基3种酶的活性均呈显著增加趋势;停止用氯氟氰菊酯汰选后,3种酶的活性又呈显著下降趋势;不接触任何药剂,随着饲养世代数的增加,其酯酶和谷胱甘肽S-转移酶的活性也呈下降趋势。结果提示斜纹夜蛾幼虫酯酶、谷胱甘肽S-转移酶和多功能氧化酶O-脱甲基活性的提高是斜纹夜蛾对氯氟氰菊酯抗性上升的重要原因。

摘要: E75是昆虫蜕皮级联反应中的早期转录因子之一。本研究运用RT-PCR和RACE技术,首次获得了斜纹夜蛾Spodoptera lituraE75D基因,命名为Sli-E75D(GenBank登录号:JQ266225),其开放阅读框全长1836bp,编码611个氨基酸残基,3'非翻译区全长为358bp,同时获得其5'非翻译区共341bp。经核苷酸序列比对分析,E75在鳞翅目昆虫间保守性较高,尤其3'非翻译区具有高保守性,但由于启动子不同,E75异构体mRNA5'端序列存在差异;经氨基酸序列比对,Sli-E75D与棉贪夜蛾Spodoptera littoralis、烟草天蛾Manduca sexta、家蚕Bombyx mori E75D的一致性分别为98.4%,79.3%和76.5%。基于E753'非翻译区的高保守性,利用PITA和RNAhybird程序预测了最有可能调控鳞翅目昆虫E75基因的3种miRNAs:miR-14,miR-33和miR-87。构建pET28a-Sli-E75D表达载体,分别转化BL21(DE3)和Transetta(DE3)菌株,检测大肠杆菌Escherichia coli稀有密码子对E75D原核表达的影响,SDS-PAGE结果显示,转化Transetta(DE3)菌株的pET28a-Sli-E75D可高效表达大小约74.79kD(含预测的67.19kDSli-E75D,7.6kDT7·Tag和His·Tag)的重组蛋白,与其理论分子质量基本吻合,而转化BL21(DE3)菌株的pET28a-Sli-E75D质粒只见微量重组蛋白表达。由于Transetta(DE3)菌株可补充大肠杆菌6种稀有密码子的tRNA,较BL21(DE3)更适合于E75D的外源表达。qPCR检测了斜纹夜蛾从末龄幼虫到成虫发育过程中各时间点Sli-E75的相对表达水平:Sli-E75在6龄幼虫期的表达量较低,从预蛹开始,表达量急剧升高,并在蛹中期达到最高峰,之后迅速下降,但成虫期表达水平又出现回升。这些结果有助于深入研究E75在昆虫蜕皮级联反应中的作用。

摘要: 【目的】"圆屋顶形"假说认为,对单寄生性姬蜂和茧蜂适合度而言,中间龄期幼虫寄主的品质高于更早和更晚龄期幼虫。该假说得到许多研究支持,但这些研究常以寄主幼虫脱皮划分虫龄,很少观测生殖特征,从而难以确切和全面描述适合度随寄主生长发育变化而变化的关系。本研究旨在检验"圆屋顶形"假说。【方法】本研究以斜纹夜蛾Spodoptera litura不同日龄幼虫为寄主,观测斑痣悬茧蜂Meteorus pulchricornis寄生和发育特征,并测定成蜂生殖力。【结果】线性回归分析表明,雌蜂对中间日龄寄主幼虫的寄生率大于对两端日龄寄主幼虫的寄生率;蜂卵至成虫的存活、成虫体型大小及其生殖力(产卵量)等适合度相关特征均表现出中间日龄寄主幼虫处理大于两端日龄幼虫处理。【结论】研究结果支持"圆屋顶形"假说。