摘要: 目的 建立操作便捷、快速、稳定的活体斑马鱼血栓模型。方法 研究不同浓度苯肼诱导下斑马鱼血栓形成情况。以2dpf (days post fertilization, dpf,受精后天数)健康AB系野生型斑马鱼作为实验动物,将其暴露于不同浓度(0.5μmo L/L、1μmo L/L、2μmo L/L、4μmo L/L、8μmo L/L)的苯肼中,同时设置空白对照组(胚胎养殖用水)和溶剂对照组(0.1%乙醇),处理一段时间后,通过观察斑马鱼尾静脉血流及血栓形成情况进行定性分析,利用邻联茴香胺染色法对心脏红细胞染色强度进行定量分析。结果 苯肼处理组(模型组)有血栓形成，与溶剂对照组相比有显著性差异(P<0.001)。血栓形成率先增高后逐渐减缓, 0.5μmo L/L、1μmo L/L血栓形成较少,血栓形成率分别为(19.79±1.55)%、(43.28±1.82)%、2μmoL/L、4μmoL/L、8μmoL/L均诱发较为严重的血栓,血栓形成率分别为(69.85±1.12)%、(70.56±4.60)%和(72.25±2.11)%，三组间没有差异。结论 苯肼浓度2μmoL/L为诱发稳定的活体斑马鱼血栓模型的最佳浓度。

摘要: 目的 观察和分析斑马鱼体肾的微细结构，并对其分泌的外泌体进行分离鉴定。方法 应用光学显微镜和电子显微镜技术系统观察斑马鱼体肾的显微结构和超微结构，用纳米颗粒跟踪分析（nanoparticle tracking analysis,NTA）技术检测外泌体粒径大小。结果 斑马鱼体肾紧贴并平行于脊椎，肾单位由肾小管和肾小体组成，其中肾小管可细分为近曲小管、远曲小管及颈段3种类型，肾小体由肾小球和肾小囊构成；经高碘酸-希夫（periodic acid-Schiff,PAS）染色后，可见近曲小管富含糖原颗粒，其游离面有明显的刷状缘结构。透射电子显微镜下，在肾小管的管腔观察到外泌体分布，上皮细胞游离面的胞质有少量多囊泡体和大量的晚期内涵体分布，肾小管的顶端和肾小球足细胞中亦观察到少量多囊泡体分布。通过CD9、CD63和TSG101免疫组织化学和免疫荧光检测显示，多囊泡体及其外泌体在肾小管管腔的游离面高表达，在肾小体和管腔内表达较弱。NTA和透射电子显微镜观察结果显示，分离获得的斑马鱼体肾外泌体呈茶托状，粒径众数为144.4 nm，符合外泌体形态和直径大小特征。结论斑马鱼体肾具有哺乳动物肾脏的典型结构，为体内的泌尿器官。肾小管具有分泌外泌体的能力，其形成是多囊泡体向细胞游离面释放到胞外的过程。本研究结果为水生实验动物泌尿器官的功能研究及相关模型的开发应用奠定了形态学基础。

摘要: 糖尿病是一组代谢紊乱性疾病,其发病机制至今尚未完全阐明。糖尿病主要分为1型糖尿病、2型糖尿病和妊娠糖尿病。常用的糖尿病模型动物主要有小鼠、大鼠、兔、小型猪和猕猴等。另外,斑马鱼(Danio rerio)作为一种模式生物,在很多领域已被用于构建人类疾病模型,包括1型糖尿病和2型糖尿病研究中斑马鱼模型也取得了一定的应用进展。本文总结了现有的斑马鱼糖尿病模型构建方法以及应用进展,以期为今后糖尿病斑马鱼模型研究及应用提供参考。

摘要: 斑马鱼(Zebrafish,Danio rerio)作为一种优良的动物模型已经被广泛用于发育生物学、遗传学和毒理学等研究领域。由于斑马鱼在眼睛形态、解剖结构、基因表达及功能等方面与人类存在极大的相似性,并且具有发育快、体外受精、胚胎透明、易于观察等优势,目前已越来越多地用于眼睛发育及相关疾病如眼睛缺损、青光眼、白内障、视杆视锥细胞变性、糖尿病视网膜病变等的研究。本文综述了斑马鱼眼睛发育及结构,以及作为研究眼睛疾病模型的优缺点,从而探讨斑马鱼在人类眼睛疾病研究中的应用价值。

摘要: 目的研究冈田酸(okadaic acid, OA)对斑马鱼幼鱼神经行为功能的影响,初步探索斑马鱼模型在神经退行性疾病研究中的应用前景。方法用0.05、0.10和0.20μmol/L的OA溶液处理受精后3 d(3 dpf)的斑马鱼幼鱼7 d,记录幼鱼死亡数,并利用行为学分析系统采集幼鱼30 min内的游动轨迹,测量每组幼鱼的游动距离和呆滞时间。采用实时荧光定量PCR法检测各处理组幼鱼体内蛋白磷酸酶2A(PP2A)和α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)的表达情况。结果与对照组比较,0.05μmol/L和0.10μmol/L OA组处理7 d后的幼鱼存活率无显著差异(P值均>0.05),游动轨迹也无明显改变。与对照组比较,0.20μmol/L OA组幼鱼存活率明显降低,游动活力明显下降,游动距离明显缩短,呆滞时间明显延长(P值均<0.05);而且幼鱼体内PP2A基因表达水平明显下调(P <0.05),α7-nAChR基因表达水平则无明显改变(P>0.05)。结论 0.20μmol/L的OA处理7 d导致斑马鱼幼鱼的神经行为功能异常。