摘要: 目的探索并优化适合于斑马鱼成鱼内脏组织的病理学检查技术。方法将斑马鱼整条固定于Dietrich's固定液后,分段切开,取包含内脏组织的胸腹段,剥除斑马鱼鱼皮,梯度乙醇脱水时间优选为30 min、二甲苯透明、石蜡包埋、沿斑马鱼体轴纵向连续切片、HE染色后用温水冲洗切片进行颜色反蓝,正置显微镜下观察效果。结果经过反复的条件摸索和优化,光学显微镜下观察心脏、肝脏、脾脏、胆囊、肾脏、胰腺、消化道、精巢和卵巢等组织切片和染色的效果,可见斑马鱼组织均切片完整,无折叠或断裂,各脏器的解剖学与组织细胞学结构清晰,易于辨认,细胞核与细胞质染色分明。结论优化后的斑马鱼成鱼内脏组织病理学方法效果较为理想,可获得高质量的内脏组织学标本。

摘要: 目的探讨易洛魁族同源盒5a（Irx5a）基因对斑马鱼胚胎早期造血相关转录调控因子的影响。方法于斑马鱼胚胎1细胞受精卵期,显微注射Irx5a-EGFPmRNA斑马鱼胚胎作为实验组、显微注射增强型绿色荧光蛋白（EGFP）mRNA斑马鱼胚胎作为实验对照组、野生型斑马鱼作为空白对照组,应用qPCR检测相关造血转录调控因子在斑马鱼胚胎受精后9 h（9 hpf）、12 h、18 h、24 h和30 h时相的表达水平。结果实时荧光定量PCR结果表明,在原始造血转录因子1mo2、scl中,实验组从9hpf²4hpf较另外两组间明显减低;在定向造血转录因子中,c-myb实验组从12 hpf²4 hpf较另外两组间明显减低,runxl实验组从9 hpf³0 hpf较另外两组间明显减低;髓系造血转录因子pu.1和红系造血转录调控因子gata-1实验组从9 hpf³0 hpf较另外两组间明显减低,且差异有统计学意义。结论 Irx5a基因在斑马鱼原始造血、成体造血、红系造血、髓系造血的重要转录调控因子中发挥着抑制作用。

摘要: 目的观察斑马鱼鳍和鳞片色素细胞的组成、分布及形态特征。方法应用光学显微镜对AB品系斑马鱼鳍和鳞片色素细胞的显微结构进行观察。结果斑马鱼鳍上分布有黑色素细胞和黄色素细胞,未观察到虹彩细胞。根据色素细胞的分布规律,将斑马鱼鳍分为有、无斑马鱼条纹两类。鳞片中分布有黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞。黑色素细胞较大,形态上主要分为呈树突状、颜色较浅、体积较大的I类黑色素细胞和呈团状、颜色较深、个体较小的Ⅱ类黑色素细胞。黄色素细胞个体最小,呈黄色或者橙黄色。虹彩细胞较长呈长棒状或梭形,数量最少。结论斑马鱼体表有黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞三种类型色素细胞,但鳍和鳞片在色素细胞组成和分布上存在着差异,鳞片中色素细胞的种类和形态特征较鳍中色素细胞更丰富。

摘要: 目的 采用阿霉素(doxorubicin, DOX)作为阳性药物建立斑马鱼的心血管毒性模型。方法 确定DOX的10%致死浓度(LC10)与最大非致死浓度(MNLC),设置4个不同浓度的DOX溶液组(浓度:MNLC/10、MNLC/3、MNLC和LC10)、空白对照组(养鱼水处理组)和溶剂对照组(0.9%NaCl注射液)处理一定阶段的野生型AB系斑马鱼幼鱼至实验终点受精后72 h(72 hpf)。在72 hpf处收集药物处理的斑马鱼，Western blotting分析心肌肌钙蛋白T(cTnT)和肌红蛋白(Mb)的表达，在立体解剖显微镜下观察心血管系统的形态学改变，荧光定量R T-P C R检测斑马鱼组织中miRNA146a的表达。结果 在浓度≤MNLC/10时, DOX不诱发斑马鱼心血管毒性;当浓度≥MNLC/3时，可诱发斑马鱼心血管毒性，表现为血流变慢、血流缺失、静脉窦处瘀血和静脉窦处水肿，且具有剂量相关性。荧光定量RT-PCR结果显示，DOX的三个剂量MNLC/3、MNLC、LC10均显著提高miRNA146a的表达(与空白对照组比较，P<0.01)，且存在一定的剂量关系。Western blotting结果显示, DOX模型组的cTnT和Mb蛋白表达与空白对照组比较均未见明显变化(P>0.05)。结论 DOX对斑马鱼的心血管毒性作用明显,可以作为药物评价的心血管毒性模型。

摘要: 目的 建立操作便捷、快速、稳定的活体斑马鱼血栓模型。方法 研究不同浓度苯肼诱导下斑马鱼血栓形成情况。以2dpf (days post fertilization, dpf,受精后天数)健康AB系野生型斑马鱼作为实验动物,将其暴露于不同浓度(0.5μmo L/L、1μmo L/L、2μmo L/L、4μmo L/L、8μmo L/L)的苯肼中,同时设置空白对照组(胚胎养殖用水)和溶剂对照组(0.1%乙醇),处理一段时间后,通过观察斑马鱼尾静脉血流及血栓形成情况进行定性分析,利用邻联茴香胺染色法对心脏红细胞染色强度进行定量分析。结果 苯肼处理组(模型组)有血栓形成，与溶剂对照组相比有显著性差异(P<0.001)。血栓形成率先增高后逐渐减缓, 0.5μmo L/L、1μmo L/L血栓形成较少,血栓形成率分别为(19.79±1.55)%、(43.28±1.82)%、2μmoL/L、4μmoL/L、8μmoL/L均诱发较为严重的血栓,血栓形成率分别为(69.85±1.12)%、(70.56±4.60)%和(72.25±2.11)%，三组间没有差异。结论 苯肼浓度2μmoL/L为诱发稳定的活体斑马鱼血栓模型的最佳浓度。