摘要: 芳香化酶活性发现在脊椎动物脑、脑垂体和性腺中 ,但在文昌鱼脑和哈氏窝的组织特异性定位尚无可利用资料。本文用免疫细胞化学和原位杂交技术 ,首次发现芳香化酶活性组织特异性定位在幼年和性腺发育不同时期雌、雄文昌鱼神经系统 (脑和脊髓 )、轮器、哈氏窝和性腺中。芳香化酶蛋白和转录物在前脑、中脑、脊髓、轮器和哈氏窝十分丰富 ,而后脑、早期卵巢和精巢不够丰富 ;没有芳香化酶表达的部位是哈氏窝另两种细胞 (不规则形细胞和带纤毛粘液细胞 )以及成熟卵巢和精巢 ;芳香化酶免疫活性物质分布在胞质 ,核为阴性。芳香化酶在文昌鱼神经系统、哈氏窝和性腺的分布模式与低等脊椎动物中的分布模式极为类似 ,尤其是芳香化酶在脑内调节哈氏窝分泌活动的神经内分泌中枢表达 ,并形成类似脊椎动物的文昌鱼原始的脑 -芳香化酶调节系统。这些结果有力地证明 ,文昌鱼脑和哈氏窝高水平的芳香化酶活性像在其它脊椎动物中一样 ,对局部介导睾酮芳香化起着关键作用 ,同时还可能影响脑 -芳香化酶系统参与调节哈氏窝的分泌活动

摘要: 提取青岛文昌鱼 18h时期神经胚mRNA ,以NotⅠ oligo (dT) 18为引物 ,反转录合成cDNA ,在双链cDNA的 5′连接EcoRⅠ衔接头 ,与带有NotⅠ和EcoRⅠ突出末端并经过 5′脱磷的λExCellNotⅠ /EcoRⅠ /CIP载体DNA进行连接 ,经体外包装和感染NM5 2 2宿主菌 ,得到了 3 6× 10 4个独立的重组噬菌体克隆。从中随机选取 2个克隆提取DNA ,NotⅠ、EcoRⅠ双酶切 ,电泳结果显示 2个克隆含有不同的插入片段。以α 32 P dCTP标记的文昌鱼hedgehog基因片段为探针 ,通过噬菌斑原位杂交对cDNA文库进行了两次筛选 ,得到了 16个阳性克隆。由此认为文昌鱼神经胚cDNA文库确已建立。

摘要: 用雌、雄激素受体的多克隆抗体对不同发育时期的文昌鱼神经系统和哈氏窝进行免疫识别。结果显示 ,雌、雄激素受体免疫阳性识别发生在文昌鱼端脑和中脑的中部与后部 ,以及神经管的背面和中央 ,后脑则为免疫阴性反应。两种激素受体免疫阳性物多数分布在神经细胞核内及其神经纤维 ,少数在胞质。雌、雄激素受体免疫阳性识别还出现在文昌鱼哈氏窝基部的上皮细胞核内或胞质中。雌、雄激素受体在文昌鱼神经系统和哈氏窝的免疫识别部位与脊椎动物相类似。研究表明 ,性类固醇激素像在脊椎动物中那样 ,可对文昌鱼脑和哈氏窝进行反馈调节

摘要: 首次用雌二醇、睾酮和孕酮受体的多克隆抗体在文昌鱼性腺、脑泡和神经管中进行免疫细胞化学定位研究。结果表明 ,不同发育时期的卵原细胞和卵母细胞中都存在雌激素、雄激素和孕激素受体。在小生长期 ,3种受体通常定位在卵原细胞和早期初级卵母细胞的胞质或核膜 ;在大生长期和成熟期 ,则定位在胞质和核质。在雄性 ,3种类固醇激素受体分布在不同发育时期的精原细胞、精母细胞和精子细胞 (雌激素受体例外 )中 ,受体阳性物定位在胞质和核。另外 ,用免疫细胞化学方法和性类固醇激素抗体对文昌鱼不同发育时期的性腺和神经系统进行研究 ,结果揭示 ,免疫阳性物存在于不同发育时期的卵巢和精巢中。在卵巢发育早期 ,卵原细胞和卵母细胞的胞质和核仁膜对雌二醇、睾酮和孕酮抗体显示强或中等强度免疫阳性反应 ;在大生长期和成熟期 ,卵母细胞胞质和核仁膜对睾酮和孕酮抗体的免疫阳性反应明显减弱 ,而对雌二醇则显著增强。在雄性 ,随着精巢发育成熟 ,精原细胞、精母细胞和精子细胞对睾酮抗体的免疫阳性反应逐渐增强。在大生长期和成熟期 ,精原细胞和精母细胞对孕酮抗体发生强的免疫阳性反应。在成熟期则对雌二醇抗体发生免疫阴性反应。精子始终为免疫阴性。本文研究还首次发现 ,文昌鱼脑泡和神经管中存在哺乳动物神经

摘要: 用免疫细胞化学ABC法对多巴胺 (DA)和去甲肾上腺素 (NE)在文昌鱼神经系统和性腺中进行定位研究。免疫反应结果显示 :DA和NE免疫阳性神经细胞广泛分布在文昌鱼端脑后部、中脑前部和中部以及脊髓。我们还观察到 ,在文昌鱼漏斗部也有DA免疫阳性神经细胞及其纤维 ;在中脑中部 ,NE免疫阳性神经细胞及其纤维与另一个神经细胞相接触。此外 ,文昌鱼精巢和卵巢中也存在DA和NE免疫阳性物。研究结果表明 ,DA和NE可能像在鱼类中那样 ,参与调节文昌鱼哈氏窝上皮细胞的分泌活动以及性腺发育。