摘要: 【目的】为明确保幼激素受体Methoprene-tolerant基因AsMet在中华按蚊Anopheles sinensis体内的时空表达模式，并探究其对中华按蚊生殖调控和发育的影响。【方法】基于中华按蚊转录组数据，采用RACE克隆AsMet全长cDNA序列并进行分子特征分析；利用qPCR分析AsMet在不同发育阶段(蛹和雌成蚊)、 3日龄雌成蚊不同组织[头、胸、腹部前端(腹部前3节)、腹部后端(腹部剩余部分)、中肠、马氏管、脂肪体、卵巢和体壁]中的表达量；通过向中华按蚊末期雌蛹显微注射dsAsMet进行RNAi后，测定AsMet,AsKr-h1和AsVg的表达量，并观测雌成蚊卵巢发育情况、羽化率、产卵量和卵孵化率。【结果】中华按蚊AsMet(GenBank登录号：OR783325)的cDNA序列全长6 841 bp,开放阅读框(open reading frame, ORF)长3 159 bp,编码1 052个氨基酸，预测其分子质量为114.46 kD,等电点为6.63。AsMet有4个保守结构域，包括1个螺旋-环-螺旋结构域、 2个PAS结合域和1个C末端保守基序。AsMet与冈比亚按蚊An.gambiae、埃及伊蚊Aedes aegypti和尖音库蚊Culex pipiens的Met聚为一支。AsMet在化蛹后30 h和成蚊大部分阶段显著高表达，且在雌成蚊头和胸部中显著高表达，在中肠、马氏管和卵巢中呈现低表达。显微注射dsAsMet到末期雌蛹后24, 48和72 h时，AsMet的表达量较显微注射dsEGFP的对照组分别下调70.05%, 41.05%和68.64%,羽化率低于显微注射dsEGFP且在雌蚊交配吸血后卵巢发育不良，产卵量比正常注射dsEGFP的低67.58%,卵孵化率比正常注射dsEGFP的下降93.10%。【结论】AsMet表达被降低后影响中华按蚊卵巢的正常发育且使产卵量和孵化率显著降低。研究结果为深入研究JH调控中华按蚊生殖发育机理奠定基础，对保幼激素信号通路和昆虫生殖调控的分子机制的认识提供理论依据。

摘要: 【目的】克隆中华按蚊Anopheles sinensis化学感受蛋白3(chemosensory protein 3, CSP3)基因AsCSP3,分析该基因在丙烯菊酯驱避作用中的功能。【方法】采用RT-PCR方法克隆AsCSP3的全长cDNA序列；qRT-PCR检测AsCSP3在拟除虫菊酯抗性和敏感中华按蚊的4龄幼虫、早期雌蛹、晚期雌蛹、新羽化雌成蚊、羽化后第1, 3, 6和9天雌成蚊等不同发育阶段，3日龄雌成蚊触角、去掉触角的头部、去掉足的胸、腹和足等不同组织中的表达量以及0.05%丙烯菊酯熏蒸拟除虫菊酯抗性3日龄雌成蚊后不同时间的表达量；运用荧光竞争结合实验测定AsCSP3重组蛋白与丙烯菊酯、溴氰菊酯和氯菊酯的结合能力；利用CRISPR/Cas9介导的敲入技术突变AsCSP3,比较研究丙烯菊酯和溴氰菊酯对AsCSP3突变体和野生型中华按蚊的驱避作用。【结果】克隆了中华按蚊AsCSP3的全长cDNA序列，编码183个氨基酸，具有化学感受蛋白典型的保守半胱氨酸位点。AsCSP3在晚期雌蛹和新羽化雌成蚊中表达量高。AsCSP3主要在3日龄雌成蚊触角和足中表达，在抗性中华按蚊3日龄雌成蚊足中的表达量显著低于敏感中华按蚊中的，而在抗性中华按蚊触角和去除触角的头中的表达量显著高于敏感中华按蚊的；AsCSP3的表达量在丙烯菊酯诱导后2 h开始显著下调，直至24 h表达量仍然显著低于未处理的对照组的。AsCSP3重组蛋白能够结合溴氰菊酯和丙烯菊酯，而不能结合氯菊酯。AsCSP3的突变不影响中华按蚊的生长、发育、生殖力和吸血行为，也不影响溴氰菊酯的接触驱避作用，但削弱了丙烯菊酯的空间驱避作用，导致野生型中华按蚊在3 min时间内的起飞次数和飞行时间分别比AsCSP3突变体高出1.77和1.97倍。【结论】AsCSP3与丙烯菊酯的空间驱避作用可能存在潜在关联。

摘要: 【目的】探究中华按蚊Anopheles sinensis无锡株溴氰菊酯的抗性关联单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）位点和基因。【方法】对中华按蚊无锡株溴氰菊酯抗性品系（WX-LR）和敏感品系（WX-LS）杂交构建的F₂群体进行0.04%溴氰菊酯处理，测定击倒时间；采用混合群体分离分析（bulked segregant analysis, BSA）和全基因组测序相结合的方法，对获得的中华按蚊极端抗性个体和极端敏感个体混池进行全基因组重测序，筛选与溴氰菊酯抗性关联的SNP位点；采用SNP-index（SNP基因型频率）计算和候选区域定位以筛选与溴氰菊酯抗性关联的数量性状位点（quantitative trait loci, QTL）,并对候选QTL基因进行GO功能注释和KEGG通路富集；筛选溴氰菊酯抗性关联的关键基因。【结果】与中华按蚊溴氰菊酯抗性关联的SNP位点主要集中在2号和3号染色体上。99%置信区间ΔSNP-index全部分布在2号染色体上，包括12个与溴氰菊酯类抗性关联的QTL和672个功能注释的基因。最终筛选到12个溴氰菊酯抗性关联的关键基因，包括6个Trypsin基因，4个锌指蛋白基因，OAT基因和CYP4J5基因，其涉及杀虫剂代谢解毒酶和有机阴离子转运等。【结论】基于BSA测序（BSA sequencing, BSA-seq）鉴定中华按蚊无锡株溴氰菊酯抗性直接关联的基因，为深入了解中华按蚊对溴氰菊酯类杀虫剂抗性的分子机制奠定了基础。

摘要: 【目的】氟氯氰菊酯（cyfluthrin）是一种被广泛应用于农业害虫和卫生害虫防治的新型拟除虫菊酯类杀虫剂。本研究旨在探究氟氯氰菊酯对中华按蚊Anopheles sinensis的亚致死效应，为合理使用氟氯氰菊酯防治中华按蚊提供理论依据。【方法】采用WHO推荐的幼虫浸渍法处理中华按蚊4龄幼虫24 h,计算氟氯氰菊酯对中华按蚊4龄幼虫的LC₁₀和LC₃₀值；采用幼虫浸渍法以LC₁₀和LC₃₀浓度氟氯氰菊酯胁迫中华按蚊4龄幼虫24 h,统计F₀代雌雄成虫寿命和单雌产卵量，收集成虫所产卵为F₁代试虫，统计其孵化率、各发育阶段历期、羽化率、成虫产卵前期、总产卵前期和单雌产卵量，构建年龄-龄期两性生命表，预测各处理下中华按蚊种群动态。【结果】24 h内氟氯氰菊酯对中华按蚊4龄幼虫的LC₁₀和LC₃₀值分别为1.223×10^-3和4.454×10^-3 mg/L。与对照（去氯自来水处理）相比，LC₁₀和LC₃₀浓度氟氯氰菊酯处理中华按蚊4龄幼虫显著抑制了F₀代雄成虫寿命和单雌产卵量，且LC₃₀浓度氟氯氰菊酯显著缩短了F₀代雌成虫寿命。f_x7曲线显示，与对照组相比，LC₁₀和LC₃₀浓度氟氯氰菊酯处理中华按蚊4龄幼虫减少了其F₁代雌成虫产卵天数和产卵量；并且LC₁₀和LC₃₀浓度氟氯氰菊酯处理降低了F₁代l_xm_x,m_x和v_xj峰值，LC₁₀浓度氟氯氰菊酯处理中华按蚊4龄幼虫延后了其F₁代m_x峰的出现，而LC₃₀浓度氟氯氰菊酯将提前F₁代m_x峰的出现。s_xj,l_x和e_xj曲线显示LC₁₀和LC₃₀浓度的氟氯氰菊酯处理中华按蚊4龄幼虫会对其F₁代的存活率和期望寿命产生有利影响。与对照组相比，LC₁₀浓度氟氯氰菊酯处理组中华按蚊F₁代雌虫蛹历期、成虫前历期和雄虫卵历期显著延长，F₁代雄成虫寿命和总发育历期显著缩短；LC₁₀和LC₃₀浓度氟氯氰菊酯胁迫中华按蚊4龄幼虫显著升高了其F₁代成虫前期存活率，但显著减少了其F₁代单雌产卵量；LC₁₀浓度氟氯氰菊酯处理中华按蚊4龄幼虫显著延长了其F₁代平均世代周期（T）, LC₃₀浓度氟氯氰菊酯处理中华按蚊4龄幼虫却显著缩短了其F₁代平均世代周期。【结论】亚致死浓度(LC₁₀和LC₃₀浓度)氟氯氰菊酯胁迫显著抑制了中华按蚊F₁代繁殖力，提高了F₁代成虫的存活率和期望寿命，故对F₁代种群数量无显著影响。本研究结果为合理使用氟氯氰菊酯防治中华按蚊提供了理论依据。

摘要: 【目的】在全基因组水平上鉴定中华按蚊Anopheles sinensis味觉受体（gustatory receptor, GR）蛋白家族基因，分析GR基因家族成员的结构和特征，预测其家族成员可能的生物学功能，为中华按蚊GR基因家族提供信息框架。【方法】从NCBI和Vectorbase数据库中下载冈比亚按蚊An.gambiae、致倦库蚊Culex quinquefasciatus、埃及伊蚊Aedes aegypti和黑腹果蝇Drosophila melanogaster已知的GR氨基酸序列作为询问序列，通过Blast和HMM方法在全基因组水平上搜索和鉴定中华按蚊的GR家族基因并命名；通过生物信息学方法预测中华按蚊GR基因的基本特征（理化性质、基因结构及基因组定位）、保守结构域及Ka/Ks比值等；通过MEGA软件运用最大似然法构建中华按蚊和冈比亚按蚊GR基因编码蛋白系统发育树。【结果】中华按蚊基因组中共筛选鉴定出54个GR基因。参考冈比亚按蚊分类和基于系统发生关系，将中华按蚊AsGRs分为CO₂受体、苦味受体、糖受体和信息素受体4个亚家族，分别有3, 40, 6和5个受体。其中CO₂受体和糖受体聚成一支，信息素受体聚类成一个分支，而苦味受体则分散在整个系统发育树中。54个中华按蚊GR基因定位在Chr.1和Chr.2染色体上；AsGRs的氨基酸数量为128～3 429,分子量是14.85～397.08 kD,理论等电点（pI）为5.16～9.84,亲水性指数（GRAVY）介于-0.023～0.838; 54个中华按蚊AsGR基因的外显子数量为1～23个，跨度较大。大部分中华按蚊与冈比亚按蚊直系同源基因对的Ka/Ks比值都小于1,说明中华按蚊GR家族基因在进化过程中主要是受到纯化选择的作用。【结论】本研究对中华按蚊GR基因家族进行全基因组鉴定和特征分析，丰富了中华按蚊基因组数据库，为后续中华按蚊GR基因的功能研究奠定了一定基础。