摘要: 从意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica的肌肉组织中提取总RNA,采用RT-PCR的方法克隆蜜蜂第16号染色体上的丙糖磷酸异构酶基因的cDNA序列,将测序结果(GenBank登录号EU76098)与推导的氨基酸序列分别与GenBank中的其他物种进行同源比对分析。结果表明,该基因全长744bp,为完整的阅读框,编码247个氨基酸,成熟蛋白的理论分子量为26.89kD。比对结果显示AmTPI与家蚕、德国小镰、黄粉虫、丽蝇蛹集金小蜂、水稻等物种的基因相似性达69%以上,蛋白相似性达59%以上。将目的基因克隆到pGEX-4T-2融合表达载体上,并在大肠杆菌中得到成功表达,4h的表达量为总蛋白的42.1%。为了进一步探讨产物的酶学特性,实验还对表达产物进行纯化与浓缩。实验还构建增强型荧光真核表达质粒,为进一步研究AmTPI在真核细胞中的表达情况奠定基础。

摘要: 以中华蜜蜂和意大利蜜蜂为试验材料,通过组织相应无王群,把一蜂种无王群中的子脾加入到另一蜂种无王群中,进行中蜂和意蜂无王群培育非自身蜂种蜂子和改造王台特性研究,当未培育出蜂王时,分别从原有王群中调入子脾进行第2、第3期试验。结果表明:中蜂无王群中的工蜂会清除引入意蜂子脾中的蜂卵,但随着引入意蜂子脾封盖子羽化出房的意蜂幼蜂数量增加而逐渐接受意蜂幼虫,蜂群未改造意蜂王台,只培育出中蜂蜂王;意蜂无王群中的工蜂会随着引入中蜂子脾中羽化出房的中蜂幼蜂数量增加而逐渐接受中蜂卵及幼虫,并从第2期试验开始会改造中蜂王台,但最终只培育出意蜂蜂王。

摘要: 分别应用电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP－AES）和重量法测定意大利蜜蜂ApismelliferaL．食物（蜂蜜和花粉）矿物质成分和灰分含量。小叶桉EucalyptustereticornisSmith蜂蜜和花粉分别含有16种和23种矿质元素，矿物质含量分别为0．122％和1．651％，灰分含量分别为0．22％和1．33％。野坝子ElsholtziarugulosaHemslL．蜂蜜含9种元素，矿物质和灰分含量分别为0．057％和0．06％。蜜蜂食物中含量过高的矿物质和多种有害元素的存在，可能是工矿区蜜蜂的致死因素。

摘要: 【目的】揭示东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae侵染对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂的影响，为深入开展二者互作研究提供科学依据。【方法】采用Percoll不连续密度梯度离心法制备东方蜜蜂微孢子虫纯净孢子，接种羽化出房的意大利蜜蜂工蜂后制备中肠样品，通过PCR扩增东方蜜蜂微孢子虫16S rRNA和actin基因，验证接种7 d时意大利蜜蜂工蜂成虫中肠中东方蜜蜂微孢子虫的侵染有效性；利用数字PCR检测东方蜜蜂微孢子虫侵染1, 4, 7和11 d时Hsp70的拷贝数。观测和比较东方蜜蜂微孢子虫接种组及未接种组意大利蜜蜂工蜂成虫的蔗糖溶液消耗量和存活率。【结果】东方蜜蜂微孢子虫接种的意大利蜜蜂工蜂成虫中肠样品中能够扩增出符合预期大小的16S rRNA和actin基因；接种后1, 4, 7和11 d时在单头意大利蜜蜂工蜂成虫中肠中鉴定到Hsp70的拷贝数分别为36.67, 386.67, 480和25 095.33;意大利蜜蜂单头工蜂成虫在接种东方蜜蜂微孢子虫后4-13 d时的平均日蔗糖溶液消耗量[(0.0313±0.0041) g]均高于未接种对照组的[(0.0219±0.0049) g],其中在4, 5, 9和11 d时单头工蜂成虫日蔗糖溶液消耗量两组间差异显著；意大利蜜蜂工蜂成虫存活率在东方蜜蜂微孢子虫接种1-5 d时与未接种对照组中均为100%,意大利蜜蜂工蜂成虫在接种东方蜜蜂微孢子6 d时出现死亡，而未接种对照组工蜂成虫在7 d时出现死亡；意大利蜜蜂工蜂成虫在接种东方蜜蜂微孢子虫6-13 d时的存活率均低于未接种对照组的。【结论】东方蜜蜂微虫在意大利蜜蜂工蜂中肠中持续增殖，对宿主造成明显的能量胁迫，进而缩短了宿主寿命。

摘要: 【目的】本研究旨在通过蛋白组学与代谢组学联用，揭示吡虫啉胁迫对意大利蜜蜂Apis mellfera ligustica工蜂幼虫的毒性机制。【方法】将意大利蜜蜂工蜂3日龄幼虫暴露于377 ng/mL吡虫啉72 h时的6日龄幼虫进行蛋白质组学和代谢组学分析；筛选对照组和吡虫啉处理组间的差异表达蛋白和差异表达代谢物，并进行GO功能注释和KEGG通路富集；分析差异表达蛋白功能互作网络和线粒体质量控制相关分子网络，对上述意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫中线粒体质量控制相关的10个关键基因(Pgd,MUL1,HSP90α,HUWE1,NDUFS4,MRPL52,GPX,GSHS,TrxR和SOD)进行RT-qPCR验证；通过苏木精-伊红染色对上述意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫进行组织病理学分析，利用RT-qPCR检测凋亡基因Caspase-3的表达量；检测上述意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫中丙二醛和还原型谷胱甘肽的含量。【结果】吡虫啉暴露对意大利蜜蜂工蜂幼虫的存活率具有显著的负面影响，并呈现出明显的时间依赖效应。意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫吡虫啉处理组和对照组间鉴定出451个差异表达蛋白(246个下调，205个上调)和138个差异表达代谢物(42个下调，96个上调)。其中14个差异表达蛋白和8个差异表达代谢物与线粒体质量控制密切相关。吡虫啉暴露不仅干扰氨基酸代谢、蛋白质合成、TCA循环及糖代谢等基础代谢过程，还显著影响线粒体动力学调控、自噬清除、生物合成及抗氧化系统，导致线粒体质量控制失衡，造成能量合成受阻并诱发线粒体自噬与细胞凋亡。差异表达代谢物在脂肪酸代谢和氨基酸代谢通路显著富集，提示脂质过氧化反应可能降低了幼虫的能量利用效率。10个关键基因的表达量变化与蛋白质组学数据一致。与对照组比，吡虫啉处理组6日龄幼虫有明显的细胞凋亡现象，Caspase-3表达上调，还原型谷胱甘肽含量显著降低和丙二醛含量显著增加，证实了氧化应激的发生。【结论】吡虫啉暴露导致意大利蜜蜂幼虫蛋白质和糖代谢等异常，并可能通过破坏线粒体质量控制稳态，诱发氧化损伤和能量代谢紊乱，最终导致幼虫发育异常。本研究为吡虫啉的毒性机制研究提供了新的参考。