摘要: 【目的】本研究旨在通过解析意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica lncRNA15837的调控方式和作用，并检测lncRNA15837在工蜂不同发育阶段和成虫不同组织及幼虫应答蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis侵染中的表达模式，为深入探究lncRNA15837的调控功能与机制提供参考和依据。【方法】基于已获得的意大利蜜蜂7和10日龄工蜂成虫中肠高质量转录组数据，利用Miranda, RNAhybrid和TargetScan软件预测lncRNA15837靶向的miRNA及miRNA靶向的mRNA,再通过Cytoscape v3.7.1软件构建并可视化竞争性内源RNA (competing endogenous RNA, ceRNA)调控网络。使用Blast工具将靶mRNA比对至GO和KEGG数据库以获得相应的功能和通路注释。通过RT-PCR验证lncRNA15837在刚出房工蜂成虫不同组织(触角、咽下腺、脑、表皮、中肠、脂肪体和毒腺)中的表达。利用RT-qPCR检测lncRNA15837在工蜂的不同发育阶段(卵、3日龄幼虫、 1和2日龄预蛹、 4日龄蛹及1, 2, 6, 12, 15和18日龄工蜂成虫)、刚出房工蜂成虫不同组织(触角、咽下腺、脑、表皮、中肠、脂肪体和毒腺)和3日龄幼虫感染蜜蜂球囊菌后4, 5和6日龄幼虫肠道中的表达量。【结果】LncRNA15837可靶向ame-miR-21-x和ame-miR-0046-3p等29个miRNA,进而靶向1 559条mRNA,形成1个复杂的ceRNA网络；上述靶mRNA可注释到436个GO条目，其中114条靶mRNA涉及139个分子功能相关条目，115条靶mRNA涉及257个生物学进程相关条目，67条靶mRNA涉及40个细胞组分相关条目；可注释到224条KEGG通路，其中28条靶mRNA注释到内吞、吞噬细胞和溶酶体等细胞免疫通路，以及157条靶mRNA注释到JAK-STAT, Toll和Imd, NF-kappa B和Toll样受体信号通路等体液免疫通路；lncRNA15837在工蜂卵、幼虫、预蛹、蛹和成虫中差异表达，在1日龄预蛹中的表达量最低，而在3日龄幼虫中的表达量最高；lncRNA15837在刚出房工蜂成虫的触角、毒腺、脑、中肠、咽下腺、脂肪体和表皮中均有表达但表达量存在差异，在脂肪体中的表达量最低，而在毒腺中的表达量最高；相较于未接种对照组，lncRNA15837的表达量在蜜蜂球囊菌接种组4日龄幼虫肠道中表达量上调，在5和6日龄幼虫肠道中显著上调。【结论】意大利蜜蜂lncRNA15837通过ceRNA网络潜在调控胞吞作用、吞噬细胞和溶酶体等细胞免疫通路和JAK-STAT、Toll和Imd、NF-kappa B和Toll样受体信号通路等体液免疫通路；lncRNA15837在工蜂的3日龄幼虫和工蜂成虫毒腺中特异性高表达；工蜂幼虫肠道中lncRNA15837的表达被蜜蜂球囊菌侵染所激活，提示lncRNA15837是意大利蜜蜂幼虫应答蜜蜂球囊菌侵染的潜在调控因子。

摘要: 【目的】本研究旨在明确意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica piR-ame-1186994的调控功能，为进一步探究piR-ame-1186994的调控作用机制提供科学依据。【方法】通过Stem-loop RT-PCR和Sanger测序分别验证piR-ame-1186994在意大利蜜蜂6日龄工蜂成虫中肠、 12日龄雄蜂成虫精巢和7日龄蜂王成虫卵巢中的表达和序列真实性。使用相关软件预测piR-ame-1186994的靶mRNA并进行GO和KEGG数据库注释，进而构建发育信号通路、能量代谢通路及细胞和体液免疫通路相关调控网络。饲喂刚出房工蜂成虫piR-ame-1186994的模拟物(mimic)和mimic-NC(阴性对照组),利用RT-qPCR检测工蜂成虫中肠中的piR-ame-1186994及其关键2个关键靶基因(YAP1和PLD2)的相对表达量。【结果】在意大利蜜蜂6日龄工蜂成虫中肠、 12日龄雄蜂成虫精巢和7日龄蜂王成虫卵巢中均扩增出piR-ame-1186994的特异性片段。piR-ame-1186994共靶向1 097条mRNA,可注释到新陈代谢过程、结合和细胞等30条GO条目以及Wnt信号通路、内吞作用和催产素信号通路等182条KEGG通路。其中，分别有36和16条靶mRNA涉及5条发育相关信号通路(mTOR, Wnt, Hippo, AMPK和Notch信号通路)和4条能量代谢相关通路(氨基糖和核苷酸糖代谢、果糖和甘露糖代谢、糖酵解/糖异生及磷酸戊糖通路)。此外，分别有29和8条靶mRNA涉及4条细胞免疫通路(溶酶体、内吞作用、吞噬体和泛素介导的蛋白水解)和3条体液免疫通路(PI3K-Akt, MAPK和FoxO信号通路)。相较于阴性对照组mimic-NC, mimic-piR组中piR-ame-1186994的表达量在1, 3和5日龄工蜂中肠中显著上调，在2和4日龄工蜂中肠中极显著上调；靶基因YAP1的表达量在1, 3, 4和5日龄工蜂中肠中极显著下调，在2日龄工蜂中肠中显著下调；靶基因PLD2的表达量在2, 3和5日龄工蜂中肠中显著下调，在4日龄的工蜂中肠中极显著下调。【结论】piR-ame-1186994在意大利蜜蜂工蜂中肠、雄蜂精巢和蜂王卵巢中存在与表达；piR-ame-1186994通过靶向和负调控YAP1和PLD2的表达潜在调节工蜂中肠发育和免疫。

摘要: 中华蜜蜂Apis cerana cerana是我国特有蜂种，也是雅鲁藏布大峡谷国家级自然保护区内优势传粉昆虫，对维持生态系统稳定性具有重要意义。然而，随着意大利蜜蜂A.mellifera ligustica的引进，其对保护区内中华蜜蜂生存和生态系统的影响受到广泛关注。本文着重探讨了引进意大利蜜蜂对西藏地区本地中华蜜蜂及生态平衡的影响，并提出了相应的生态保护与恢复策略。意大利蜜蜂的引入对中华蜜蜂构成了多重挑战，包括削弱中华蜜蜂种群竞争力、降低繁殖效能、增加疾病交叉感染风险及破坏生态平衡，具体表现为不同蜂种蜜源争夺优势、性引诱干扰及病原传播。另一方面，引进意大利蜜蜂也可能带来了一定的正面效益，如促进经济作物授粉、提高作物产量和品质等。为保护本土蜂种优势和生态平衡，本文提出一系列生态保护与恢复策略，包括划定中华蜜蜂和意大利蜜蜂养殖区、规范蜂农放蜂等养蜂活动、加强入侵物种管理和本土物种保护、生物多样性监测以及生态补偿机制的构建等。这些建议旨在为政府部门、当地农户以及社会各界提供科学的决策依据，以促进该区域生物多样性的保护和生态系统的可持续性管理，也为我国生态涵养发展区的建设以及环境友好型产业的发展提供重要参考。

摘要: 【目的】意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica和地熊蜂Bombus terrestris是设施甜樱桃Prunus avium授粉应用最广泛的两个蜂种，二者的生物学特性和采集行为差异较大。本研究旨在在设施甜樱桃上观察比较这两个蜂种的采集行为与授粉效果差异，为更好利用两个蜂种服务于设施樱桃授粉提供依据。【方法】2023年2月在北京市顺义区双河果园中对意大利蜜蜂和地熊蜂在甜樱桃初花期和盛花期的晴天和阴天的采集行为进行监测，评价二者对设施甜樱桃的授粉效果；同时监测设施环境下的温度、相对湿度和光照强度的动态变化，分析采集频次(出巢频次和携粉巢归频次)与环境因子的关系。【结果】在晴天和阴天，意大利蜜蜂和地熊蜂的出巢频次和携粉归巢频次均与温度呈现正相关，在阴天二者的出巢频次和携粉归巢频次与相对湿度呈现负相关。意大利蜜蜂的采集行为比地熊蜂更容易受到光照强度的影响，在晴天和阴天出巢频次和携粉归巢频次与光照强度均表现出显著相关性，而地熊蜂只有在阴天的出巢频次和携粉归巢频次与光照强度呈现显著正相关。两种蜂在晴天的采集高峰分别为11:00-12:00和14:00-15:00,在阴天分别为14:00-15:00和15:00-16:00。意大利蜜蜂和地熊蜂在甜樱桃盛花期的出巢频次和携粉归巢频次均高于初花期。意大利蜜蜂的每分钟访花数量在全天各时间段均低于地熊蜂，单朵花访问时间高于地熊蜂。两种蜂授粉后的甜樱桃坐果率、单果重、果实生长速率和果形指数方面无显著差异。【结论】意大利蜜蜂和地熊蜂均可作为设施甜樱桃的高效传粉媒介，可根据授粉期天气情况选择适宜的蜂种，或调整设施环境条件，以达到最佳的授粉效果。

摘要: 【目的】本研究旨在揭示意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica成年工蜂中肠中piR-ame-1128833的调控网络和功能，为探明其作用机制提供基础。【方法】通过stem-loop RT-PCR和Sanger测序验证piR-ame-1128833在意大利蜜蜂6日龄工蜂成虫中肠、7日龄蜂王成虫卵巢和12日龄雄蜂成虫精巢中的表达和序列真实性。使用相关生物信息学软件预测piR-ame-1128833的靶mRNA并进行GO和KEGG数据库注释。通过RT-PCR和Sanger测序对piR-ame-1128833的关键靶基因Wnt-1和LAMP-1在6日龄工蜂成虫中肠、7日龄蜂王成虫卵巢和12日龄雄蜂成虫精巢中的表达进行验证。通过双荧光素酶报告基因试验验证piR-ame-1128833与关键靶基因Wnt-1和LAMP-1的结合关系。饲喂刚出房的1日龄工蜂成虫piR-ame-1128833的模拟物(mimic-piR)和阴性对照(mimic-NC)后，采用RT-qPCR检测工蜂成虫中肠中piR-ame-1128833的相对表达量及过表达piR-ame-1128833后关键靶基因Wnt-1和LAMP-1的相对表达量。【结果】piR-ame-1128833在6日龄工蜂成虫中肠、7日龄蜂王成虫卵巢和12日龄雄蜂成虫精巢中存在和表达；piR-ame-1128833靶向3 021条mRNA,可注释到代谢进程和催化活性等45条GO条目及溶酶体和MAPK信号通路等318条KEGG通路；有51条靶mRNA涉及Wnt, mTOR, Hippo, AMPK, Hedgehog, MAPK和JAK-STAT等7条生长发育相关信号通路，有53条靶mRNA涉及2条体液免疫通路(MAPK和JAK-STAT信号通路)与3条细胞免疫通路(内吞作用、溶酶体和吞噬体);靶基因Wnt-1和LAMP-1在6日龄工蜂成虫中肠、7日龄蜂王成虫卵巢和12日龄雄蜂成虫精巢中表达；piR-ame-1128833与靶基因Wnt-1和LAMP-1之间存在结合关系；相较于mimic-NC饲喂组，piR-ame-1128833的表达量在mimic-piR饲喂组2和5日龄成年工蜂中肠中极显著上调，在3和4日龄成年工蜂中肠中显著上调；过表达piR-ame-1128833后，Wnt-1的表达量在3日龄成年工蜂中肠中极显著下调，在2, 4和5日龄成年工蜂中肠中显著下调；LAMP-1的表达量在3, 4和5日龄成年工蜂中肠中极显著下调，在2日龄成年工蜂中肠中显著下调。【结论】piR-ame-1128833在意大利蜜蜂成年工蜂中肠、成年蜂王卵巢和成年雄蜂精巢中表达，通过饲喂mimic-piR能实现成年工蜂中肠中piR-ame-1128833的高效过表达，成年工蜂中肠中piR-ame-1128833通过负调控Wnt-1和LAMP-1的表达发挥潜在作用。