摘要: 脂肪体是昆虫体内物质贮备和中间代谢的重要组织。本研究通过显微形态观察、BrdU免疫组织化学和原位末端转移酶标记(TUNEL)细胞凋亡检测技术,对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂脂肪体胚后发育过程中细胞的增殖和凋亡特点进行了比较研究。结果表明:意大利蜜蜂工蜂脂肪体细胞数量的快速增加集中在幼虫发育前期(1-3龄),而细胞的凋亡则集中在蛹发育早期的2-3 d(预蛹-2日龄蛹)时间之内。在变态发育中,工蜂幼虫脂肪体凋亡降解后重新组建形成成虫的脂肪体。本研究为昆虫脂肪体的功能研究以及昆虫组织细胞自噬和凋亡的机制研究提供一定的证据。

摘要: 蜜蜂是自然界主要的授粉昆虫;新烟碱类杀虫剂(neonicotinoid insecticide)通过结合害虫体内乙酰胆碱受体(nAChR)使害虫致死,是目前广泛用于田间害虫防控的杀虫剂。本研究以意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica和新烟碱类杀虫剂的代表品种吡虫啉为材料,应用免疫组织化学的方法,研究了正常成年蜜蜂脑内蘑菇体及视叶nAChR-α7的表达和分布;分析了亚致死剂量新烟碱类杀虫剂吡虫啉对nAChR-α7表达和分布的影响。结果表明,nAChR-α7在正常蜜蜂脑蘑菇体和视叶中均可检测到,在蘑菇体中分布相对较少,但在视叶分布丰富。吡虫啉对nAChR-α7在视叶的表达和分布有显著抑制作用,但对蘑菇体nAChR-α7的表达没有显著影响。结果提示,新烟碱类杀虫剂吡虫啉除了文献报道的抑制nAChR的表达外,还能抑制nAChR-α7的表达量,这是新烟碱类杀虫剂作用机制的新发现。

摘要: 分别从中华蜜蜂Apisceranacerana和意大利蜜蜂Apismellifera工蜂毒腺中抽提总RNA ,通过RT PCR方法扩增 ,各得到了蜂毒前溶血肽原蛋白的cDNA ,再将扩增产物克隆到pGEM Teasy载体上 ,进行测序和序列分析。结果表明 ,所扩增到的这两个片段长度均为 2 13bp ,均为编码蜂毒前溶血肽原的cDNA ,并分别推导出两者所编码的氨基酸序列。经序列比较 ,中华蜜蜂前溶血肽原与意大利蜜蜂、印度蜜蜂Apisceranaindica前溶血肽原的同源性都为 97%。所报道的中华蜜蜂蜂毒前溶血肽原的核苷酸序列的GenBank登录号为AF48790 7。

摘要: 利用BactoBac系统将意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2(AmPLA2)基因cDNA克隆至转移载体pFastBacHTa中,得到pBacHT-AmPLA2,再将其转化入含穿梭载体Bacmid的受体大肠杆菌DH10Bac中,通过转座作用,得到含AmPLA2基因的重组病毒rBacmid-AmPLA2的DNA。提取其基因组DNA,用脂质体介导转染粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4,得到重组病毒rACV-Bac-AmPLA2。用此重组病毒感染Tn-5B1-4细胞,在细胞中表达AmPLA2。SDS-PAGE电泳结果显示,与6×HisTag融合表达的产物蛋白分子量约为18kD左右,表达量约占细胞总蛋白的5·35%。Westernblot印迹显示,融合表达产物能与意大利蜜蜂蜂毒AmPLA2抗血清发生免疫反应。生物活性测定显示,含表达产物的细胞蛋白粗提物对底物蛋黄的酶活力约为6·13μmol·min-1·mg-1。

摘要: 以意蜂Apismellifera蜂王浆为材料 ,经过硫酸铵分段盐析 ,DEAE Sepharose柱层析和SephacrylS 2 0 0凝胶过滤 ,得到纯化的超氧化物歧化酶 (SOD) ,纯化倍数 10 4 0 0 ,比活力 5 3 0 5U mg。该SOD经SDS PAGE显示单一蛋白带。温度对该酶活力的影响较小。Cu、Zn、Fe和Mn等元素含量测定发现该酶只含有Cu和Zn。酶经圆二色谱测定后 ,其α螺旋、β折叠和无规则卷曲蛋白构型的含量分别为 2 6 1%、5 3 8%和 2 2 0 %。等电聚焦电泳测得酶的等电点为 4 6 9、4 85和 5 0 1。NR R单向和双向SDS PAGE表明该酶含有链内二硫键。氨基酸组成分析发现该酶由约 4 0 2个氨基酸残基组成 ,其中Asp、Gly、Leu、Ala、Glu和Val的含量较高。脲可抑制SOD活性 ,并使其紫外光谱发生变化 ,荧光发射峰强度变小。溴乙酸 (BrAc)抑制酶的活力 ,使其紫外光谱发生变化 ,荧光发射峰强度变小。二巯基苏糖醇 (DTT)使酶的活力发生变化 ,紫外吸收峰增大 ,荧光发射峰变小