摘要:  【目的】本研究旨在揭示ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道发育过程的调控作用。【方法】通过Stem-loop RT-PCR和Sanger测序分别验证ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中的表达和序列真实性。饲喂ame-miR-14的模拟物(mimic-ame-miR-14)和抑制物(inhibitor-ame-miR-14)及其相应的阴性对照mimic-NC和inhibitor-NC对ame-miR-14分别进行过表达和敲降，利用RT-qPCR检测意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中ame-miR-14的表达量。利用生物信息学软件预测ame-miR-14的靶基因并进行相关分析。利用RT-qPCR检测ame-miR-14的过表达和敲降后其靶基因和在4-6日龄幼虫肠道中的相对表达量。【结果】ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中真实存在和表达。相较于饲喂mimic-NC，饲喂mimic-ame-miR-14后ame-miR-14表达量在意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中均为显著上调；相较于饲喂inhibitor-NC，饲喂inhibitor-ame-miR-14后ame-miR-14表达量在意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中皆为显著下调。ame-miR-14共靶向309个基因，可注释到45条KEGG通路和36个GO条目；进一步分析发现ame-miR-14可靶向14个生长发育相关基因，并与和之间存在潜在的靶向关系。过表达ame-miR-14后，相较于mimic-NC组，mimic-ame-miR-14组的4日龄幼虫肠道内表达量下调，5和6日龄幼虫肠道内表达量均为显著下调；敲降ame-miR-14后，相较于inhibitor-NC组，inhibitor-ame-miR-14组4日龄幼虫肠道内表达量下调，5日龄幼虫肠道内表达量显著上调，6日龄幼虫肠道内表达量上调。与mimic-NC组相比，过表达ame-miR-14后mimic-ame-miR-14组的表达量在4-6日龄幼虫肠道内皆显著下调；与inhibitor-NC组相比，敲降ame-miR-14后inhibitor-ame-miR-14组的表达量在4-6日龄幼虫肠道内均为上调。【结论】ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在和表达；通过饲喂模拟物和抑制物能够分别实现意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内ame-miR-14的有效过表达和敲降；ame-miR-14通过负调控和的表达潜在参与调节幼虫肠道发育。

摘要:

摘要: 【目的】探究肠道菌Bombella intestini对意大利蜜蜂Apis mellifera营养代谢的影响。【方法】采用无菌工蜂模型构建的方法培养无菌新蜂300只，随机分为2个组，每个组3个重复，每个重复50只。对照组（CK）饲喂40%无菌蔗糖水，试验组（BI）饲喂含106cfu/mLB.intestini的40%蔗糖水，两组均饲喂无菌花粉料与无菌去离子水。每日按时饲喂并记录采糖量、采粉量、蜂体重。于第9天采集样品测定身体成分、血淋巴生化指标、营养代谢相关基因表达等。【结果】BI组平均日采糖量显著高于CK组（P <0.05），但是蜂体重并无显著差异（P>0.05）；身体成分分析表明，BI组干物质、粗脂肪含量均显著低于CK组（P <0.05），粗灰分含量显著高于CK组（P <0.05），粗蛋白含量略高于CK组,碳水化合物略低于CK组，统计学差异不显著（P> 0.05）;BI组的血淋巴中总蛋白（TP）、甘油三酯（TG）、胆固醇（TCHO）和高密度脂蛋白（HDL）含量均显著低于CK组（P <0.05）;BI组细胞色素B(CytB)、细胞色素C(CytC)、卵黄原蛋白（Vg）、胰岛素肽类（ILP）和胰岛素受体（LnR）均显著上调；其中CytB和CytC是参与线粒体生物氧化的两种线粒体蛋白，其表达量上调说明物质分解代谢水平提高。【结论】肠道菌B. intestini可以改善蜜蜂食欲，促进采食，增加蜂体营养储备，促进养分的分解代谢。

摘要: 【目的】利用已获得的纳米孔（Nanopore）长读段测序数据对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica的细胞内吞相关基因和全长转录本进行鉴定、分析和验证，为深入开展相关研究提供参考和依据。【方法】通过Blast工具将意大利蜜蜂全长转录本比对Nr和KEGG数据库以筛选出细胞内吞相关基因和全长转录本。采用gffcompare软件将全长转录本与西方蜜蜂Apis mellifera参考基因组（Amel＿HAv3.1）上注释的转录本进行比较以优化已注释基因的结构。使用Astalavista软件鉴定细胞内吞相关基因的可变剪接（Alternative splicing,AS）事件类型，利用IGV浏览器对剪切体结构进行可视化，通过PCR验证AS事件的真实性。利用TAPIS pipeline进行可变多聚腺苷酸化（Alternative polyadenylation,APA）位点预测和分析，并通过MEME软件鉴定APA位点上游的基序（motif）。【结果】共鉴定到意大利蜜蜂细胞内吞相关的170个基因与991条转录本。共优化了89个细胞内吞相关基因的结构，其中5′端延长的基因有36个，3′端延长的基因有35个，5′端和3′端同时延长的基因有18个。鉴定到细胞内吞相关的28个基因的666次AS事件，其中最丰富的AS类型是3′端可变剪接（Alternative3'splice site,A3SS）。PCR结果证实了涉及整合素β-nu样异构体基因、Ras样GTP结合蛋白基因和rab11家族相互作用蛋白4基因的2种类型的4次AS事件真实性。共鉴定到120个细胞内吞相关的基因含有1个及以上的APA位点，并在APA位点上游鉴定到多个motif，一致性序列为NBMNHHHBMNSNNCBNVSNNNNNNNNNNNVNNNN。【结论】鉴定到意大利蜜蜂细胞内吞相关的170个基因及991条全长转录本，发现细胞内吞相关基因发生大量的AS事件并含有丰富的APA位点，优化了西方蜜蜂参考基因组上注释的细胞内吞相关基因的结构。

摘要: 【目的】东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae侵染蜜蜂导致微孢子虫病，但侵染机制未明。本研究拟在前期工作基础上，验证nce-miR-15325的相对表达量及序列信息，并进一步检测nce-miR-15325及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂Apismelliferaligustica工蜂过程的相对表达量，为进一步探究nce-miR-15325调控侵染的功能和机制提供依据。【方法】利用Stem-loopRT-PCR和Sanger测序对nce-miR-15325进行相对表达量及序列信息验证。利用相关生物信息学软件对nce-miR-15325的靶基因进行信息预测及分析。通过RT-qPCR检测nce-miR-15325及其靶基因的相对表达量。【结果】鉴定到在东方蜜蜂微孢子虫孢子中nce-miR-15325真实存在并表达。预测到nce-miR-15325的11个靶基因，其中分别有3、4、7和4个靶基因可注释到KEGG、GO、Nr和Swissprot数据库。与接种后1 d相比，nce-miR-15325在2 dpi(day post inoculation, dpi)的表达量变化不显著，而在4、6和8 dpi时，相对表达量均显著下调（P<0.05），总体表达趋势呈下调。相较于1 dpi，靶基因NCSS在2、4、6和8 dpi的表达量均显著下调（P<0.05）；类似的，靶基因DTⅢ在2、4、6和8dpi的表达量均显著下调（P<0.05），总体上表现出下降的表达趋势。【结论】证实了东方蜜蜂微孢子虫孢子中nce-miR-15325存在和表达的真实性，明确了在东方蜜蜂微孢子虫侵染过程的nce-miR-15325及其靶基因的动态表达模式，揭示nce-miR-15325通过正调控NCSS和DTⅢ表达潜在调节侵染过程。