摘要: 本研究在大肠杆菌工程菌中重组表达弓形虫棒状体蛋白2(ROP2),并初步评价其免疫反应性。主要步骤为体外细胞培养速殖子,提取总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增ROP2基因全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLysS工程菌中诱导表达重组融合蛋白GST-6×His-ROP2,最后以重组蛋白与人源弓形虫抗血清的Western blotting反应评价rROP2免疫反应性。本研究获得了ROP2全长重组蛋白,初步证明其良好的免疫反应性,为进一步改进弓形虫免疫学诊断方法,研究分泌蛋白与宿主细胞的相互作用奠定了基础。

摘要: 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(Soluble tachyzoite antigen,STAg)与排泄-分泌抗原(Excreted/secreted antigens,ESA)单独或联合鼻内免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用。分别用PBS 20μL和STAg 20μg、ESA 20μg及联合抗原(STAg 10μg+ESA 10μg)鼻内免疫BALB/c处女鼠2次,间隔2周。末次免疫后第13天处女鼠与雄鼠以2∶1同居。妊娠第8天用弓形虫速殖子(8000个/只)灌胃攻击所有孕鼠。妊娠第18天处死,计算活胎率,并测定孕鼠肝、胎盘和胎鼠脑组织弓形虫抗原和孕鼠脾组织内虫荷,同时测定孕鼠小肠冲洗液SIgA、血清IgG水平。结果表明,ESA组和联合抗原组活胎率显著高于PBS组,STAg组、ESA组和联合抗原组胎盘及胚胎感染率均低于PBS组,联合抗原组最低。孕鼠在弓形虫速殖子攻击后,PBS组明显出现竖毛、倦怠、腹部塌陷等异常表现,感染率为100%,死亡率为22.22%,而STAg组、ESA组和联合抗原组有轻微症状,感染率分别为85.71%、57.14%、57.14%,死亡率分别为16.67%、0%、0%。STAg组、ESA组和联合抗原组脾组织内虫荷均显著低于PBS组,减虫率分别为72.19%、72.29%、78.45%,ESA组和联合抗原组小肠冲洗液特异性SIgA均显著高于PBS组,联合抗原组最高,血清特异性IgG抗体水平差异不显著。由此可见,ESA单独或与STAg联合免疫可诱导孕鼠小肠液高水平SIgA,显著降低脾组织虫荷,显著提高胚胎存活率,表现出明显的垂直传播阻断的作用。

摘要: 以纯化弓形虫分泌抗原做胶体金标记,在硝酸纤维膜上包被弓形虫分泌抗原和兔抗弓形虫分泌抗原抗体,封闭液封闭后,组装制成弓形虫抗体金标检测卡,测定其符合率、精密性和稳定性。弓形虫抗体金标检测卡检测弓形虫抗体阴性和阳性质控品的符合率为100%;精密性(CV值)为3%;37℃和常温保存时间分别为12天和18个月;孕产妇、恶性肿瘤患者和健康体检者的弓形虫抗体金标检测卡检测结果与ELISA试剂盒检测结果的符合率达到96%。结果表明,弓形虫抗体金标测试卡是一种快速、简便、特异性强的弓形虫抗体检测试剂。

摘要: 采用RT-PCR技术从弓形虫虎源分离株中扩增出ROP10基因,将其克隆入pMD18-T载体中进行测序和生物信息学分析,并将目的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达。该基因全长1761bp,编码586个氨基酸,其中前28个氨基酸残基构成信号肽序列。与GenBank中报道的RH株相比,16个核苷酸存在变异,导致7个氨基酸发生改变,但两者N-联糖基化位点的数量和位置没有差异,两虫株核苷酸和推导氨基酸序列的同源性分别为99.2%和98.8%。转化重组质粒pETROP10的大肠杆菌BL21(DE3)在IPTG的诱导下,可表达出分子量为67.6 kDa的重组蛋白,表达量占菌体蛋白的13.8%。

摘要: 应用１２５碘－标记弓形虫经尾静脉感染受孕１４ｄ的昆明种小鼠，动态观察分布和受侵细胞变化情况，结果显示：孕鼠脑感染率为３０．６０％，胎鼠头感染率为７１．２０％，胎鼠头／躯干的放射性比值为１．３２～５．９５，随受染时间的延长而增高。放射自显影的光电镜观察提示，弓形虫感染后４～８ｈ虫体即在胎鼠脑胶质细胞内被发现。４８ｈ细胞核内可见，细胞退变崩解。７２ｈ脑神经细胞显著减少。实验结果为妊娠期感染弓形虫易导致胎儿神经管畸形提供实验病理学基础。