摘要: 目的建立弓形虫miRNA探针定量检测法。方法采用高通量测序技术筛选出不同弓形虫虫株间表达量高且差异不明显潜在靶标,并对其不同时间点(0 d、1 d、3 d、5 d、7 d)外周血的表达及诊断效能进行研究。结果高通量测序表明, miR-252、miR-3641、miR-509-5p、miR-1285、miR-140、miR128-1、miR-191、miR-3426具有作为血液中弓形虫生物检测靶标的潜在性。通过对感染弓形虫RH株和M49株小鼠的miR-191诊断效能分析后表明,敏感性分别为85%和95%,特异性均为100%。根据miR-191制备纳米金探针,对不同时间点感染弓形虫RH株和ME49株大鼠的血液靶标miR-191进行定量分析表明,感染后7 d内感染弓形虫miR-191表达情况相对稳定。制作弓形虫RH株、弓形虫ME49株、伯氏疟原虫、约氏疟原虫、隐孢子虫,鼠肝炎病毒和金黄色葡萄球菌感染的小鼠模型,与对照组比较分析表明,miR-191在感染弓形虫RH株和ME49株的小鼠模型中出现高表达,而在感染细菌、病毒和其它寄生虫的小鼠模型中均未出现表达。结论弓形虫miR-191具有作为检测靶标的应用价值。

摘要: 用弓形虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，取脾细胞，与Ｓｐ２／０ 细胞融合，获得３ 株能稳定分泌抗弓形虫单克隆抗体的细胞。细胞培养上清液和腹水中的单克隆抗体效价分别为１∶１６ ～２５６ 和１０ － ６ ～１０ － ７ 。单抗类型均为ＩｇＭ。杂交瘤细胞经液氮冻存１２ 个月后，复苏生长良好，分泌活性稳定。在ＭｃＡｂ－ Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ 实验中，所能测出可溶性抗原的最小浓度为１０ ｎｇ／ ｍＬ

摘要: 目的猕猴作为珍贵的实验动物,资源逐步匮乏,医学生物学研究所灵长类中心笼养猕猴种群自然流产、难产、早产和死胎(统称为妊娠异常)病例时有发生,带来了一定的损失。因此,逐一查找猕猴妊娠异常原因,针对性地提出预防和控制措施,对提高猕猴繁殖率保护猕猴资源具有重大现实意义,同时也为研究人的生殖机理奠定基础。方法通过参照引起人自然流产的因素,又考虑到猴自身的特性,主要从以下方面入手来分析猕猴妊娠异常原因:病原体,猴易感的弓形虫(Tox,toxoplasma),环境因素及其他因素。实验中,我们对三年来收集的29例妊娠异常雌猴样品进行病原体检测分析,并与正常分娩组和正常猴群组做对照。结果统计结果显示,妊娠异常组猕猴弓形虫感染率达34.4%,明显高于正常分娩组(12.5%)和正常猴群组(5%);不同的饲养环境中妊娠异常猕猴的数量也有显著差异。结论弓形虫感染、环境条件造成的应激反应及猕猴自身条件都与猕猴妊娠异常相关,对此,我们针对性地提出了预防和控制措施来降低妊娠异常率。

摘要: 通过概述检测弓形虫的主要方法,推论了"国标"推荐两种血清学检测方法的主要选择依据,推荐了进一步深入检测且较可靠的免疫学方法。

摘要: 目的建立弓形虫快速鉴定方法,进行国内实验动物感染调查,为国家标准的修订提供参考依据。方法选择2012年12月至2016年12月期间全国60个不同厂家的12 394只实验动物(包括:猴290只、小型猪425只、犬579只、兔1 234只、地鼠372只、豚鼠1 363只、大鼠987只、小鼠7 144只)作为调查对象。采用ELISA方法检测动物血清中弓形虫抗体IgG和循环抗原CAg。利用PCR技术鉴定弓形虫p30基因。应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术识别弓形虫虫体。结果用ELISA从12 394份动物血清中检出4份弓形虫抗体IgG阳性。在这4份抗体IgG阳性样本中都发现了弓形虫虫体和DNA。通过PCR扩增p30基因的分子特性证明了样本中弓形虫病原体的存在。通过直接镜检实时动态显微视屏摄录技术,在这些样本中发现了弓形虫速殖子。2012年12月至2016年12月期间,对12 394只实验动物调查结果显示,弓形虫感染率为0.03%(4/12 394)。结论 ELISA、PCR、直接镜检实时动态显微视屏摄录技术相结合可完成实验动物的弓形虫检验工作。国内实验动物中存在弓形虫感染。因此,建议设计合理的筛查程序用于防止动物传播的弓形虫病。有必要开发新的诊断工具,特别是快检技术用于这一重要人兽共患病的未来研究。