摘要: 粉尘螨Dermatophagoides farinae是一种重要的医学螨类。本文用光镜和扫描电镜研究了粉尘螨雌雄生殖系统的形态和结构。结果表明:雄性生殖系统由睾丸、输精管、附腺、射精管、阳茎及附属交配器官组成。睾丸位于血腔末端,不成对,精原细胞、精母细胞和精子依照精子发育的顺序有规则地分布在其内部。雌性生殖系统包括交配孔、囊导管、储精囊、囊导管、卵巢、输卵管、子宫、产卵管及产卵孔,其中卵巢由一个中央营养细胞和围绕其周围的卵母细胞组成。

摘要: 粉尘螨Ⅱ类变应原(DerfⅡ)是粉尘螨Dermatophagoides farinae主要变应原之一,可引发Ⅰ型变态反应。从深圳地区挑取活粉尘螨,经形态鉴定后纯培养,提取其总RNA,RT-PCR扩增出DerfⅡ基因,克隆到pMD18-T载体后测序。通过计算机软件分析该基因的多态性。将该目的基因克隆到pET-His表达载体上得到重组质粒pET-DerfⅡ。工程菌经IPTG诱导培养,表达DerfⅡ目的蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。重组DerfⅡ蛋白通过6His-tag蛋白纯化系统进行分离、纯化,并进行Western blot检测该重组蛋白与对粉尘螨过敏患者血清中IgE的反应性。结果表明,克隆的5株深圳地区的DerfⅡ基因与GenBank公布的DerfⅡ(AB195580.1)核苷酸序列同源性为96.8%99.3%,推导的氨基酸序列同源性为93.8%98.6%。表达纯化的5种重组DerfⅡ蛋白经Western blot检测,表明都具有良好的变应原性。

摘要: 【目的】利用扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)观察屋尘螨Dermatophagoides pteronyssinus颚体、躯体、外生殖器及足等的形态结构。【方法】从床尘、枕尘中采集屋尘螨,分离出雌雄成螨,在体视显微镜下清洗处理活螨后,用SEM观察其外部形态特征。【结果】SEM照片显示,屋尘螨螯肢钳状,须肢扁平;体表具细密皮纹,似指纹状,纹间距小于2μm。外生殖器位于腹面正中,雌螨为产卵孔,雄螨生殖孔具1对叶状生殖盖。肛门呈纵行裂孔,雄螨具2个肛吸盘。雌螨足跗节末端各具爪垫1个,雄螨跗节Ⅳ具2个吸盘。【结论】本研究观察结果为尘螨鉴定提供了更多依据。

摘要: 目的构建尘螨变应原Der f1原核表达体系,并了解其分子特征。方法提取粉尘螨总RNA,用RT-PCR合成Der f1编码基因,将其克隆至pMD19-T载体,亚克隆至表达载体pET-28a(+),转化至大肠杆菌并用IPTG诱导表达。用生物信息学软件对测序结果进行分析并预测其空间结构。结果从粉尘螨总RNA中扩增获得Der f1 cDNA片段,成功构建了表达质粒pET-28a(+)-Der f1,Western blotting显示原核表达获得成功。测序结果提交GenBank,登陆号为EU095368,该基因长966 bp,与参考序列同源性达99.9%,推测其编码氨基酸321个,属疏水蛋白,位于细胞外,信号肽位于1～18氨基酸处。同源性分析提示Der f1和Eur m1相似率为88%,而Der f1和Der p1的相似率为77%,分子进化树中粉尘螨和梅氏嗜霉螨聚成一簇。Der f1的二级结构由α-螺旋(109 aa,33.96%)、延伸链(55aa,17.13%)、β-转角(18 aa,5.61%)和随机卷曲(139 aa,43.30%)组成。结论尘螨变应原Der f1原核表达获得成功,为进一步生产重组变应原奠定了基础。生物信息学分析表明粉尘螨和梅氏嗜霉螨的亲缘关系可能更近,而与屋尘螨关系稍远,此与现行的形态学分类系统并不符合。

摘要: 通过提取屋尘螨和粉尘螨疫苗研制用的原始种子和生产种子基因组DNA作模板,分别设计Der p1和Der f1各2套内外扩增引物并进行一步法套式PCR,根据扩增出目的片段来检测尘螨变应原Der p1和Der f1基因片段,并以培养基提取物为阴性对照和已通过形态学鉴别为纯屋尘螨、纯粉尘螨的基因组DNA为阳性对照。PCR产物经电泳后切胶回收并克隆到T载体上,进行DNA序列分析并在GenBank中进行同源性比较。结果显示,从屋尘螨和粉尘螨疫苗研制用的原始种子和生产种子分别扩增出含有屋尘螨和粉尘螨主要变应原Der p1和Der f1基因片段,扩增部分的序列与GenBank数据库里相应序列同源性为100%。从阴性对照提取物中未扩增得到目的基因片段,从阳性对照DNA提取物中能扩增得到目的变应原Der p1和Der f1基因片段。本研究首次应用套式PCR技术鉴别了屋尘螨和粉尘螨原始种子和生产种子,为尘螨疫苗研制以及工业化生产提供了一种有效的质量控制手段。