摘要: 目的 制备bcr启动子驱动-增强绿色荧光蛋白(bcr-EGFP)转基因小鼠模型，在活体水平验证bcr启动子的启动特异性。方法 以慢性髓性细胞白血病(CML)细胞株K562细胞基因组为模板，PCR扩增1.1 kb bcr启动子,在扩增产物的上、下游引物加入了Ase I、EcoR I酶切位点,AseI、EcoRI双酶切pEGFP-N1真核表达质粒载体，去除载体自身的CMV启动子，并将1.1 kb bcr启动子定向克隆到EGFP绿色荧光蛋白报告基因上游，构建pbcr-EGFP真核表达载体，并将此重组质粒瞬时转染K562细胞和NIH3T3细胞，进行表达验证。显微注射法制备bcr-EGFP转基因小鼠，采用PCR方法进行初步整合检测。结果 显微注射583枚受精卵，移植到30只受体鼠输卵管中，受体鼠妊娠26只，共生产首建鼠90只,经过PCR检测，4#(♀)、36#(♂)和81#(♂)等3只F0代为转基因整合阳性鼠。结论 成功制备了bcr-EGFP转基因小鼠，为进一步研究bcr启动子在CML转基因小鼠模型制备的安全性和可靠性提供线索和帮助。

摘要: 目的 观察10月龄淀粉样前体蛋白(APP)和早老素(PS)双转基因(APP/PS-Tg)小鼠的各种病理学检测指标,为后续阿尔茨海默病(AD)研究提供参考。方法 (1)用自主活动试验和水迷宫试验观察行为学改变;(2)用HE染色、硫代黄素S染色和TUNEL荧光染色观察脑组织病理学改变、纤维状Aβ沉积和细胞凋亡;(3)用多重荧光检测系统对血清和脑组织匀浆进行与免疫调节和信号通路有关的细胞因子检测。结果 (1)行为学试验中, 10月龄APP/PS-Tg小鼠自主活动次数与阴性对照比较差异无统计学意义,但Morris水迷宫试验显示APP/PS-Tg小鼠学习认知的时间(即潜伏期)落后于阴性对照组。(2)脑组织切片HE染色,可见APP/PS-Tg小鼠大脑皮层和海马区可见散在老年斑病变。老年斑大小不一,部分老年斑周围可见不典型的小胶质细胞反应,而阴性对照无此病理改变。用硫代黄素S染色,在激光共聚焦显微镜下用波长429 nm观察, APP/PS-Tg小鼠大脑皮层和海马区可见散在颗粒状绿色荧光,荧光颗粒大小不一,主要分布在大脑皮层,海马区数量较少。阴性对照小鼠大脑皮层和海马区未发现有荧光颗粒。用TUNEL试验检测脑内细胞凋亡情况,在激光共聚焦显微镜下在520±20 nm的荧光下观察绿色荧光标记的凋亡细胞。APP/PS-Tg小鼠与阴性对照比较,差异有极显著统计学意义(P≤0.01)。(3)血清细胞因子检测, 10月龄APP/PS-Tg小鼠与阴性对照组比较,白介素(IL)-2、IL-10、IL-12、IL-12、IL-17α、肿瘤坏死因子(TNF)-α和转化生长因子(TGF)β3含量明显下降,其中IL-2、IL-10、IL-17α和TNFα含量均有显著下降(P≤0.01);用脑组织匀浆检测细胞因子，APP/PS-Tg小鼠IL-2、IL-17α、TNF-α和TGFβ1, 2, 3的含量较阴性对照高,但差异无统计学意义(P≥0.05)。结论 在APP/PS-Tg小鼠的评价指标中，Morris水迷宫试验是一个敏感可靠的行为学试验方法;脑组织切片HE染色、硫代黄素S染色和TUNEL试验均简单易行，可从不同角度检测APP/PS-Tg小鼠的脑内病理改变;血清和脑组织匀浆细胞因子的检测显示有些细胞因子可能参与阿尔茨海默病的发病过程。

摘要: 目的 利用高压水动力法建立C57BL/6小鼠乙型肝炎病毒(HBV)转染模型，并对其进行初步的观察及药物评价。方法 将10μg腺病毒相关病毒载体(pAAV)-HBV1.2质粒采用高压水动力法尾静脉注入C57BL/6小鼠体内,连续5周观察小鼠血清中的HBsAg、HBV DNA等表达情况，并利用该模型初步评价拉米夫定的抗病毒效果。结果 pAAV-HBV1.2质粒高压水动力法注射C57BL/6小鼠后，在小鼠体内分泌HBV的抗原及病毒颗粒。尾静脉注射2周内小鼠血清中HBsAg阳性率为100%，连续观察至第5周，22.2%小鼠血清中HBsAg有持续表达。小鼠血清中HBVDNA水平在1～4周时含量明显高于≥103拷贝/mL(临床患者阳性标准)。肝组织病理学观察(HE染色)可见不同程度肝细胞炎性改变，肝组织免疫组化可见到HBsAg和HBcAg表达。另外，使用抗病毒药物拉米夫定干预该小鼠模型,其血清中HBV DNA水平明显下降。结论 初步建立的C57BL/6小鼠HBV转染模型,是一个适用于药物筛选及疫苗研究的有效模型,为抗病毒治疗研究奠定了一定基础。

摘要: 目的 建立小鼠肝炎病毒（MHV）双抗体夹心ELISA检测方法。方法 将4株特异性抗MHV N蛋白的单克隆抗体进行抗体配对试验确定3D4H9为捕获抗体，以辣根过氧化物酶（HRP）标记的4G9F2为检测抗体；通过方阵试验确定了3D4H9和4G9F2-HRP的最佳工作浓度分别为12.8 ng/mL和70.84 ng/mL，以P/N>2，同时D_450nm≥0.248作为阳性临界值的判定。结果 该ELISA方法重复性变异系数小于10%，与小鼠细小病毒、仙台病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒3型等无交叉反应，对358份血清样品进行检测，与美国EBI公司的间接ELISA试剂盒检测结果无明显差异。结论本研究建立的双抗体夹心ELISA方法检测MHV具有较高的特异性和敏感性，可以用于MHV的病原学检测。

摘要: 目的 建立一种高效、简便的分离纯化小鼠精原细胞的方法。方法 利用胶原酶IV/脱氧核糖核酸酶I(DNaseI)/分散酶(dispase)组合酶消化法和差异性贴壁原理，从新生小鼠睾丸中分离、纯化精原细胞。经细胞形态学观察、视黄酸激活基因8(Stra8)免疫化学鉴定精原细胞并进行纯度分析。结果 分离到的细胞经Stra8检测呈阳性,精原细胞纯度可达86%。结论 该方法可高效地分离和纯化小鼠精原细胞。