摘要: 目的 从实验动物品种和环磷酰胺给药剂量两方面，探索环磷酰胺致雄性小鼠生殖损伤的模型。方法 健康6周龄雄性ICR小鼠和BALB/c小鼠，随机分为8组：ICR-control、ICR-60、ICR-100、ICR-200、BALB-control、BALB-60、BALB-100、BALB-200组。ICR-control、BALB-control组腹腔注射氯化钠溶液，每周1次，共5周。ICR-60组和BALB-60组实验于前5 d每天腹腔注射环磷酰胺60 mg/kg; ICR-100、BALB-100组和ICR-200、BALB-200组分别给予100 mg/kg、200 mg/kg环磷酰胺腹腔注射，每周一次，共5周。实验周期35 d,小鼠每周称重，记录小鼠死亡情况。第36天处死小鼠，分离睾丸和附睾组织，称重并计算小鼠睾丸和附睾指数，一侧睾丸固定、石蜡包埋、切片，HE染色，观察睾丸组织结构，另一侧睾丸冷冻，测定超氧化物歧化酶活性。结果 BALB-60、BALB-200组小鼠死亡率为100%,ICR-100、ICR-200、BALB-100组死亡率较高，ICR-60组死亡率为0。ICR实验动物模型组睾丸指数和附睾指数均有不同程度的降低，BALB-100组仅有睾丸指数下降。HE染色显示，各模型组均造成生精小管损伤，损伤程度与环磷酰胺浓度相关。ICR-60组小鼠睾丸SOD活性降低，其他组睾丸SOD活性无明显改变。结论 ICR-60为较为合适的环磷酰胺小鼠生殖损伤模型。

摘要: 目的 构建并繁育C57BL/6J-ROSA26^em（C3+）基因过表达小鼠，鉴定并分析其基因型和目的蛋白的表达情况，并验证检测方法的可适用性。方法 将构建的C57BL/6J-ROSA26^em（C3+）基因过表达阳性founder鼠与野生型小鼠配繁，获得的杂合子小鼠采取同胞交配方式（雌雄比1∶1）,得到纯合子小鼠。使用鼠尾组织DNA PCR法鉴定杂合子及纯合子基因型，通过Western blot法检测小鼠间脑组织C3蛋白的表达差异。分析C57BL/6J-ROSA26^em（C3+）基因过表达小鼠杂合子及纯合子的体质量变化和繁殖性能。结果 C57BL/6J-ROSA26^em（C3+）基因过表达杂合子小鼠通过同胞交配可获得纯合子小鼠。蛋白印迹法检测发现，与野生型小鼠相比，C3蛋白在基因修饰小鼠组织内高表达。C3基因的过表达不影响小鼠繁殖，纯合子间可以稳定配繁。但是，C3基因的过表达显著降低了5周龄后转基因雌鼠的体质量。结论 采用全同胞交配方式，并通过PCR法进行基因型鉴定，可稳定获得C57BL/6J-ROSA26^em（C3+）基因过表达小鼠。

摘要: 目的 MIWI蛋白C-端及3’UTR部分缺失突变小鼠的构建，探究该部分缺失对MIWI蛋白功能的影响。方法 运用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了MIWI蛋白C-端及3’UTR部分缺失的雄鼠。首先，通过育性实验明确此突变是否会导致雄鼠不育。其次，通过HE染色等组织学方法明确雄鼠精子发生缺陷出现的时间点。最后，通过Western blot和免疫荧光染色探究该雄鼠不育的分子缺陷和潜在的分子生物学机制。结果 育性实验结果显示Miwi^+/Del2杂合雄鼠完全不育，精子计数显示其精子总数下降了63%,Western blot实验结果显示Miwi^+/Del2杂合雄鼠中MIWI蛋白显著下降，HE结果显示其圆形精子形态异常，精子涂片结果显示其畸形精子率为74%,Western blot和免疫荧光染色结果显示睾丸鱼精蛋白下降显著，提示精子变形过程中鱼精蛋白产生和（或）替换受影响，无法产生正常的长形精子。结论 成功构建了一种MIWI蛋白C-端及3’UTR部分缺失的小鼠Miwi^+/Del2。MIWI蛋白的C-端缺失可导致雄性不育。

摘要: 目的 探究高脂饲料喂养KM小鼠造成小鼠血液高凝状态的可行性，为高凝状态的研究提供合适、简便的动物造模方法。方法 将KM小鼠随机分为对照组和实验组两组：对照组用普通饲料喂养，实验组用高脂饲料(脂肪供能占比60.65%)喂养。于第30天测量小鼠体质量并采尾静脉血测定小鼠活化部分凝血酶原时间(activated partial thromboplastin time, APTT)、凝血酶原时间(prothrombin time, PT),通过比较对照组与实验组小鼠血液凝血指标的差异，判断高脂饲料喂养是否能够造成小鼠血液高凝状态的发生。结果 在相同的饲养条件及采血止血方式下，相较于对照组，实验组通过高脂饲料喂养30 d后，KM小鼠体质量明显升高(P<0.001),PT、APTT明显缩短且有统计学意义(均P<0.01),实验组小鼠血液呈现高凝状态。结论 通过高脂饲料喂养可成功构建PT、APTT缩短的小鼠高凝状态模型。

摘要: 目的 建立减毒的脊髓灰质炎病毒(poliovirus, PV) Sabin株的荧光定量PCR检测方法，为PV病毒载量检测提供快速、精准的检测方法。方法 首先，针对PV的3个血清型VP1基因编码特异序列构建标准质粒；其次，将经PCR鉴定和测序分析验证的质粒按10倍稀释制作标准曲线，从而建立检测PV的SYBR Green荧光定量PCR(qPCR)方法，并验证该方法的特异性、敏感性和重复性；最后，将本方法用于检测经减毒活疫苗株感染人源化小鼠模型组织中的病毒载量。结果 经PCR鉴定和测序分析，标准质粒序列正确；PV 3种血清型的标准曲线特异性好，log拷贝数与Ct值具有良好的线性关系，相关性系数(R)均大于0.99,扩增效率在99%～110%,检测灵敏度为10 copies/μL,高于普通PCR 100倍。荧光定量PCR反应的扩增曲线呈S型，且熔解曲线主峰单一，表明特异性较好，扩增条件可靠。应用该方法检测感染后hPVR小鼠模型的不同组织的病毒载量，发现仅在脊髓和脑组织中检测出PV,呈现神经组织噬性。结论 本文建立的SYBR Green荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性，可用于检测感染的hPVR小鼠模型组织中的病毒载量，为后续研究PV发病机制及PV疫苗体内安全性及有效性提供了可靠的实验方法。