摘要: 建立一种能对MHV_1、MHV_3、JHM、A_(59) 4种常见小鼠肝炎病毒(Murine Hepatitis Virus,MHV)进行分型检测的SNaPshot新方法。根据MHV 4种常见毒株基因序列比对结果,设计内外两对PCR通用引物和4个单碱基延伸引物,提取MHV 4种常见毒株RNA,逆转录后进行PCR扩增,纯化扩增产物,用SNaPshot方法进行单碱基延伸,将产物进行毛细管凝胶电泳,根据电泳结果分析毒株基因型。优化SNaPshot分析条件,进行灵敏度、特异性分析。用ELISA法和SNaPshot方法检测41例小鼠(Mus musculus)血清样本,将阳性样本进行克隆测序检测。当T1T4引物修饰的poly T的数量分别为0、3、10和15,其浓度比为4︰6︰5︰10,引物大小分别为16 bp、19 bp、26 bp和31 bp时,SNa Phot分型检测MHV c DNA的最低浓度为1.25 mg/L,特异性为100%,与ELISA和T-克隆测序比较,其准确性为100%(41/41),阳性样本均为JHM毒株。实验结果说明,所建立的SNaPshot检测方法能对MHV_1、MHV_3、JHM、A_(59)进行分型检测,并且具有灵敏、特异、准确的优点。

摘要: 为了研究山丹黄参多糖对四氯化碳(CCl4)致小鼠(Mus musculus)急性肝损伤及相关酶活性的影响,对50只小鼠分别灌胃0.2 ml山丹黄参多糖(12.5、25.0、37.5 g/L)或生理盐水7 d,最后一次灌胃1 h后腹腔注射1%的CCl4橄榄油溶液0.2 ml,16 h后处死小鼠,比色法检测血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活力的变化,显微镜观察肝组织结构的变化,免疫组织化学法检测肝组织中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)表达的变化。与正常对照组相比,实验对照组小鼠体重减轻,血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活力显著升高(P<0.01),肝明显肿胀,肝组织结构不清,肝细胞出现炎性坏死,转化生长因子-β_1(TGF-β_1)阳性表达明显增强(P<0.01)。与实验对照组相比,山丹黄参多糖各组小鼠体重增加,血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活力明显降低(P<0.01),肝无明显肿胀,肝索清晰,炎性坏死很少,细胞结构清晰,转化生长因子-β_1阳性表达明显减少(P<0.01)。表明一定剂量的山丹黄参多糖能增强机体活力,促进机体新陈代谢,降低正常细胞的凋亡,对四氯化碳造成的肝组织损伤有一定的保护作用。

摘要: 构建系统发生树时,其拓扑结构会在不同的基因组区域产生不一致性。对此问题,贝叶斯一致性分析法(BCA)可在全基因组规模上进行系统发生树分析,并进而对不一致性信息进行量化统计。采用此方法对由C3H/Hu小鼠(Mus musculus)和129Sv小鼠回交多代产生的129S1小鼠进行系统发生树分析,输入相应的一组序列文件,用若干生物信息学软件(如VCFtools,Repeat Masker,PAUP*4.0,Mr Model Test,Mr Bayes等)对其进行屏蔽重复序列、序列比对等处理,辅以Perl语言脚本,最终得到全基因组范围不同区段系统发生树不一致信息。在小鼠10号染色体的所有99个基因座中,支持129S1和129Sv品系小鼠为姐妹关系的拓扑结构占了84.7%(后验概率最高),这证明了C3H/Hu小鼠对129S1小鼠基因组的贡献程度较小。结果表明,贝叶斯一致性分析法有助于基因组不同区段进化历史的研究。

摘要: 为探讨多能性转录因子OCT4和SOX2在昆明小鼠(Mus musculus)2-细胞胚胎发育过程中与2-细胞胚胎阻滞发生的相关性,本研究应用实时荧光定量PCR技术检测了小鼠卵母细胞及在M16培养液中培养的不同发育阶段体外受精胚Oct4和Sox2基因的表达,并利用实时荧光定量PCR和免疫荧光技术比较了2-细胞胚、2-细胞阻滞胚和4-细胞胚的OCT4和SOX2的表达与定位。采用ANOVA对实验所得的数据进行分析,P<0.05被认为是具有显著性差异。研究结果显示,2-细胞胚只有24.8%发育成4-细胞胚,75.2%的2-细胞胚发生了阻滞。Sox2和Oct4的m RNA在MⅡ期卵母细胞、原核胚、2-细胞胚、4-细胞胚、桑椹胚和囊胚中都有表达。Oct4 m RNA的表达水平在4-细胞胚显著高于2-细胞胚和2-细胞阻滞胚(P<0.05),Sox2 m RNA的表达水平在2-细胞胚显著高于2-细胞阻滞胚和4-细胞胚(P<0.05),而后两者之间没有差异(P<0.05)。OCT4蛋白在2-细胞胚和4-细胞胚中与核共定位,但在2-细胞阻滞胚中弥散存在于胞质中。SOX2蛋白在以上3类胚胎中始终定位于细胞核。上述结果提示,转录因子OCT4和SOX2的表达和定位与小鼠2-细胞胚胎发育阻滞相关,母源性SOX2表达的维持对胚胎合子基因组激活(ZGA)的发生具有重要作用,母源性OCT4的异常定位可能影响了合子基因组激活相关基因的激活,而合子中Oct4的表达影响合子基因组激活后胚胎的发育。

摘要: 探讨X射线辐射对小鼠(Mus musculus)胰腺组织的损伤效应,对血清胰岛素含量及胰淀粉酶活性的影响,分析X射线对小鼠胰腺内、外分泌部功能的影响。将成年小鼠随机分为1 Gy、3 Gy、5 Gy实验组和0 Gy对照组(每组20只),各组小鼠给予对应剂量X射线辐射(连续3 d,每天辐射一次,每次3 min)。取胰腺组织制作组织切片,用生物显微技术观察胰腺组织结构的变化,取小鼠血液,制备血清,用双抗体夹心法测定胰岛素含量,用比色法检测胰淀粉酶酶活性的变化。结果显示,X射线辐射引起小鼠胰腺组织肿胀,细胞核变大,细胞变性、坏死;X射线辐射后515 d,1 Gy辐射组小鼠胰岛素含量与对照组相比较有不同程度的升高,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01),第20天时略有下降,差异不显著。3 Gy辐射组各期小鼠胰岛素含量与对照组相比均下降,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。5 Gy辐射组各期小鼠胰岛素含量与对照组相比均下降,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01),第15天起全部死亡;1 Gy辐射组小鼠胰淀粉酶活性相比对照组变化不显著(P>0.05),3Gy辐射组小鼠胰淀粉酶活性相比对照组均有不同程度的升高,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);5 Gy辐射组小鼠胰淀粉酶活性较对照组降低,差异极显著(P<0.01)。结果表明,X射线辐射能引起小鼠胰腺组织结构损伤,影响小鼠血清胰岛素含量和血清胰淀粉酶的活性,引起胰腺功能异常。