摘要: 乙二醇(ETG)和1,2-丙二醇(PROH)具有高细胞渗透性和低毒性特点,常被用于人及多种哺乳动物早期胚胎冷冻保存。为了比较ETG和PROH对小鼠2-细胞胚的冷冻保护效果,本试验分别采用这两种冷冻保护剂,对小鼠2-细胞胚进行冷冻保存,并采用冻后体外培养和囊胚移植进行冷冻效果检测。结果表明,PROH组胚胎解冻后胚胎存活率与ETG组无显著差异,但PROH组4-细胞胚发育率和囊胚发育率显著高于ETG组(82.7%vs.64.6%,61.2%vs.29.1%,P<0.01)。囊胚移植结果表明,2-细胞胚胎冻存后能够发育为正常的后代,PROH组和ETG组的囊胚移植后妊娠产仔率无统计学差异(P>0.05),但均显著低于对照组(P<0.05)。为了分析两组胚胎冻存后损伤情况,对解冻后的胚胎细胞微丝进行检测,结果显示ETG组微丝受损的胚胎数高于PROH组。本研究结果证明采用PROH作为冷冻保护剂冷冻保存小鼠2-细胞胚的冻存效果优于ETG。

摘要: 通过免疫组化、免疫荧光和小鼠胚胎-子宫内膜上皮细胞共培养体系,研究了前蛋白转换酶Proprotein Convertases(PCs)家族中的Furin和PC7在小鼠妊娠早期子宫和胚胎中的表达及对胚胎植入的影响。结果显示:Furin和PC7在妊娠D1-D4小鼠子宫的腺上皮和D5-D7小鼠子宫的蜕膜、腺上皮高表达;PC7在植入前胚胎的2-细胞和4-细胞期表达很低,8-细胞期表达开始增加,囊胚期滋养外胚层有显著的高表达。Furin的抑制剂Dec-RVKR-CMK可显著抑制共培养体系中胚胎的粘附和扩展。以上结果表明,Furin在植入期胚胎的粘附和扩展中发挥重要作用。此外,Furin和PC7可能参与子宫内膜蜕膜化和早期胚胎发育。

摘要: 尝试改进并建立一种较可靠的、适合小鼠胚胎质量参考鉴定的双重荧光染色(细胞计数)方法。与传统方法相比,本实验中抗羊脾细胞抗血清的最佳稀释度为1∶5,作用时间为30min。豚鼠补体最佳稀释度为1∶5,两种分染染料H33342和PI的工作浓度均降低至5.3μg/ml便可着色,染色时间延长至90min,加大了染料工作液中柠檬酸钠的浓度,并在计数观察前增加压片这一步骤。染色过程中应注意避免血清物质对抗体补体的不良影响以及避光和快速的操作。双重荧光染色后小鼠胚胎内细胞团(ICM)细胞着色为蓝色,滋养层(TE)细胞着色为粉红色,数目清晰可辨。此方法可以作为一种简洁有效的小鼠胚胎质量鉴别参考方法。

摘要: 作为胚胎冷冻保存的基础性研究,冷冻保护剂的渗透性和毒性研究非常重要。本试验选用1,2-丙二醇、甘油、乙二醇和二甲基亚砜4种常用冷冻保护剂,对小鼠2-细胞胚胎进行渗透性和毒性研究。结果显示:1.5mol/L的1,2-丙二醇、乙二醇和二甲基亚砜冷冻保护剂对2-细胞胚胎的渗透性显著高于甘油保护剂;4种冷冻保护剂对细胞膜的完整性没有影响;1.5mol/L的乙二醇、1,2-丙二醇和甘油保护剂处理后的2-细胞胚胎的囊胚发育率和孵化率与对照组胚胎比较差异不显著(P>0.05),但显著高于二甲基亚砜处理后的2-细胞囊胚发育率和孵化率(P<0.01)。结果表明:在4种冷冻保护剂中,乙二醇和1,2-丙二醇适合于小鼠2-细胞胚胎冷冻保存。

摘要: 以前对小鼠的研究表明,优势雄鼠的尿液对雌性的吸引力比从属雄鼠大;同时,包皮腺分泌到尿液中的两个雄性信息素E-β-法尼烯和E,E-α-法尼烯含量相应升高,而尿液本身产生的两个雄性信息素成分——脱氢小蠹素和S-2-仲丁基-二氢噻唑没有出现有效差异。为研究我们最近从小鼠(Musmusculus)包皮腺发现的两个雄性信息素16碳醇和16碳乙酸酯与雄性小鼠社会等级的关系,我们将雄性小鼠两两配对饲养30天,让它们经历足够的社会争斗,建立起稳定的优势和从属关系。双项选择测试表明,优势雄鼠的尿液对雌鼠的吸引比配对(组内)的从属鼠的强,优势雄鼠和来自另一配对组(组间)的从属鼠尿液对雌鼠的吸引无差异。这说明优势和从属关系是相对于同一社群内的个体存在的。我们进一步用二氯甲烷分别萃取包皮腺分泌物和尿液,然后用气质联用(GC-MS)来定性和定量地分析组内优势和从属个体气味的化学组成的差异。结果表明:只有优势雄鼠的包皮腺产生的E-β-法尼烯和E,E-α-法尼烯含量一致高于从属雄鼠,而16碳醇和16碳乙酸酯以及尿液本身的脱氢小蠹素和丁基-二氢噻唑两个雄性信息素都无差异。说明小鼠只利用包皮腺产生的两个分子量较小的雄性信息素浓度的相对升高传递社会优势地位的信息。