摘要: 目的研究泛素羧基末端水解酶L1 (ubiquitin C-terminal hydrolase L1,UCH-L1)基因缺失对雌性小鼠生殖系统的影响。方法利用阴道涂片、免疫组织化学、蛋白质印迹和RNA干扰等方法,分析UCH-L1基因缺失对小鼠卵巢功能及卵泡发育的影响。结果 UCH-L1基因缺失纯合子成年雌性小鼠的体质量降低,运动困难,且子宫偏细。在UCH-L1基因缺失纯合子小鼠的卵巢和子宫中检测不到UCH-L1蛋白表达,卵巢体积明显小于杂合子小鼠,其卵巢皮质层存在一些原始卵泡或闭锁卵泡,没有成熟卵泡和黄体。雌激素受体(estrogenreceptor,ER)、卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)、黄体生成素受体(luteinizing hormone receptor,LHR)及孕酮受体(progesterone receptor,PR)等生殖关键受体在UCH-L1缺失纯合子小鼠和杂合子小鼠卵巢中都有表达,其中纯合子小鼠卵巢中ER的表达水平明显低于杂合子小鼠。通过RNA干扰的方法下调生发泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞中UCH-L1的表达,能明显降低卵母细胞的成熟率。结论 UCH-L1基因缺失雌性小鼠不具备形成成熟卵泡及排卵的能力,卵巢中ER表达量显著降低。推测UCH-L1有可能通过下调卵巢中ER的表达,影响卵母细胞成熟及排卵过程。

摘要: 目的通过4种途径感染后检测5型腺病毒(Ad5)在C57BL/6J体内的分布。方法 112只C57BL/6J小鼠分为4组,以滴鼻、灌胃、尾静脉及腹腔注射方式每只小鼠给予1×10～9 pfu/m L的Ad5溶液100μL,分别在感染后1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d和7 d每组处死雌雄小鼠各2只,取淋巴结、睾丸、附睾、子宫、卵巢、脾脏、肾脏、肝脏、肺、心脏、脑、血液和骨髓组织进行荧光定量PCR检测。结果滴鼻组在肺和脊髓组织中检测到Ad5,肺组织中Ad5在感染后4 d下降比较多;灌胃组在所有组织中均没有检测到Ad5;尾静脉注射组在肝脏和脾脏中检测到Ad5,且下降速度比较慢;腹腔注射组在脊髓、脾脏、附睾和睾丸中检测出Ad5。腹腔注射组脊髓中Ad5的含量比滴鼻组约高10倍,脾脏中Ad5的含量与尾静脉注射组脾脏中的含量相当,附睾和睾丸中Ad5含量只有其他阳性组织中检测出含量的1%～10%。结论 Ad5的肺部感染实验,可每3 d滴鼻一次;肝脏感染实验,可以用尾静脉注射方法;脾脏感染实验,可以采用尾静脉注射或腹腔注射方法;脊髓感染实验,可以采用腹腔注射方法。

摘要: 目的利用成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白9[clustered regularly interspaced short palindromic repeat(CRISPR)/CRISPR-associated protein 9(Cas9)]基因编辑技术构建抑制素基因敲除小鼠模型,并对其表型进行初步分析。方法根据抑制素α亚基的第一外显子碱基序列,设计单链向导RNA(single guide RNA,sgRNA)识别序列,构建sgRNA表达质粒。利用T7 RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9 mRNA后,将sgRNA/Cas9 mRNA显微注射入C57BL/6J小鼠的受精卵,通过PCR和基因测序法检测新生小鼠抑制素α亚基的基因碱基突变情况。选取F2代基因敲除纯合子的雄鼠和雌鼠,分别取雄鼠睾丸和雌鼠卵巢进行观察,并进行石蜡切片和HE染色分析。结果共获得了12只F0代抑制素基因敲除小鼠,选取8号雄鼠与C57BL/6J雌鼠回交,得到F1代小鼠,再相互交配得到F2代小鼠。F2代小鼠各基因型比例符合孟德尔定律,基因敲除小鼠不存在胚胎致死现象。F2代纯合子小鼠睾丸和卵巢发生癌变且无法生育。结论成功构建了抑制素基因敲除小鼠模型,F2代纯合子小鼠的癌变表型显示抑制素在小鼠生殖系统中发挥重要功能。

摘要: 目的建立盐敏感性高血压小鼠模型,用降压药硝苯地平验证模型的有效性。方法采用C57BL/6J小鼠为研究对象,分别设定常规饲料饲喂的正常组、高盐饲料饲喂的高盐组和高益饲料饲喂后给予硝苯地平的干预组。采用无创血压测量系统测量各组小鼠的血压变化情况;采用血液生化分析仪测定小鼠血清的肝功能、肾功能、血脂、血糖和离子等生化指标;通过苏木精-伊红染色观察小鼠肝、肾和颈动脉的组织学变化。结果与正常组小鼠血压相比,高盐组小鼠的收缩压和舒张压均显著升高(均P<0.01),而干预组小鼠血压显著下降(均P<0.01)。与正常组相比,高盐组小鼠的肝功能指标天冬氨酸转氨酶、碱性缚酸酶、白蛋白、血清总蛋白和直接胆红素水平,以及血脂指标胆固醇、腎功能指标尿酸、钙离子和镁离子水平都有显著变化(均P<0.05),而干预组则逐步恢复。组织病理学显示,高盐组小鼠的肝和肾都有不同程度的损伤。结论高盐饮食可成功建立盐敏感性高血压小鼠模型,硝苯地平可有效降低模型小鼠的血压。

摘要: 目的通过超声引导建立心内注射人肺癌细胞骨转移小鼠模型。方法在超声引导下,将人肺癌A549和NCI-H1299细胞分别注入NOD/SCID和BALB/c-nu/nu小鼠左心室,结合小动物活体成像、X线和小动物Micro-CT等多种小动物影像学方法观察模型建立和骨转移发生情况。采用HE染色法进行肿瘤组织的病理学观察。结果在超声引导下进行心内注射肺癌细胞时动物全部存活。小动物活体成像显示小鼠的中轴骨和四肢骨位置均有发光区域。X线及小动物Micro-CT对小鼠全身骨骼进行三维重构,显示小鼠胫骨平台和肩关节等部位均出现明显的骨质和骨膜缺损及破坏,骨正常组织形态消失,呈溶骨性改变,其影像学表现符合肿瘤性骨破坏的改变。大体解剖可见小鼠的中轴骨和四肢骨关节被肿瘤组织包裹,出现不同程度的骨转移灶。结论超声引导下心内注射肺癌骨转移模型能够有效提高建模成功率,较真实地模拟临床肺癌患者骨转移的生物学特性,能够为肺癌转移机制研究、抗转移治疗和个体化治疗等研究提供实验工具。