摘要: 目的探讨细胞蛋白质降解通路调控分子在小鼠神经系统中的表达和分布情况。方法以6周龄野生型C57BL/6J小鼠眼、脑、脊髓、坐骨神经和肌肉组织为材料,采用蛋白质印迹法检测不同组织、解剖部位和亚细胞结构中蛋白质降解通路相关蛋白的分布和表达差异。结果蛋白质降解通路相关蛋白组织蛋白酶D(Cathepsin D)、溶酶体关联膜蛋白2(lysosomalassociated membrane protein 2,LAMP2)、自噬微管相关蛋白轻链3A/B(microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3,LC3A/B)、自噬相关蛋白3(autophagy-related protein 3,Atg3)、Ras相关GTP结合蛋白7(Ras-related GTP-binding protein 7,Rab7)、钙蛋白酶(Calpain)大小亚基以及钙蛋白酶抑制蛋白(Calpastatin)在小鼠眼、脑、脊髓和肌肉中均有分布,但表达水平有一定差异。与小鼠脊髓相比,坐骨神经中Calpastatin含量没有明显差异(P>0.05),但泛素、Cathepsin D、LAMP2、LC3A/B、Atg3、Rab7、Calpain1大亚基含量明显减少(P <0.05),Calpain小亚基含量明显增加(P<0.05)。结论生理条件下泛素-蛋白酶体系统和自噬系统在细胞中广泛存在,且在神经元中其主要发生于胞体;而Calpain系统中剪切型Calpain小亚基的含量在轴突束中相对较高,这提示在神经元轴突中Calpain降解通路可能发挥主要功能。

摘要: 目的分析小鼠品系、胚胎移植方式和移植数量对胚胎移植结果的影响,以进一步优化并提高胚胎移植效率。方法通过超数排卵及体外受精获得277个基因修饰小鼠品系的胚胎,将不同数量的胚胎移植至假孕雌鼠的单侧或双侧输卵管中,分析比较不同体外受精率品系、不同移植胚胎数及不同移植方法对窝产仔数和产仔率的影响。结果体外受精率在0%～39%的品系组窝产仔数(4.61±1.92)和产仔率[(19.21±9.70)%]均明显低于其他各组(均P <0.01),体外受精率60%～69%组比90%～100%组的窝产仔率明显升高(P <0.05)。移植胚胎数较少时(5枚),受体雌鼠能够妊娠,但窝产仔数较少,易发生食仔现象。移植胚胎数在10枚以上时,各组窝产仔数和产仔率均较高。其中,胚胎移植数量在15枚左右时产仔率最高,达到(46.67±11.56)%,明显高于其他各组(均P <0.01),表明此时胚胎利用率最大;移植数量达到25枚时,平均窝产仔数(9.67±1.53)最多,明显高于其他各组(均P<0.01);移植胚胎数增加到30枚后,窝产仔数(8.33±0.58)和产仔率[(27.33±2.31)%]均有所下降,表明此时已超过小鼠子宫能承受的最大负荷。单侧移植和双侧移植的窝产仔数和产仔率均未见明显差异(P>0.05)。结论体外受精率低于40%的小鼠品系的平均窝产仔数及产仔率均较低。移植胚胎数在15枚左右时,胚胎利用率最大;移植胚胎数在25枚左右时,窝产仔数最多。单双侧移植的窝产仔数和产仔率均无明显差异。

摘要: 目的探索针对磷酸化人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)免疫组织化学染色实验中冷冻组织切片的最佳固定与保存条件。方法在BALB/c-nu/nu小鼠中建立人源性乳腺癌细胞BT474的皮下移植瘤模型,对比不同的抗原固定条件和存储时间下,免疫组织化学染色观察肿瘤模型中磷酸化HER2的信号变化。结果冰冻切片用体积分数为10%的甲醛溶液固定5 min,可以维持良好的细胞形态。在-20℃的存储条件下,肿瘤组织中磷酸化HER2蛋白在12周内表达稳定。结论冰冻组织切片进行免疫组织化学染色用时短,可以作为常规石蜡切片染色方法的补充或者替代。

摘要: 目的应用声辐射力脉冲弹性成像（acoustic radiation force impulse imaging,ARFI）技术探索四氯化碳（CCl₄）诱导的肝纤维化模型小鼠肝内剪切波速变化特征与意义。方法 6周龄雄性C57BL/6J小鼠分为3组:对照组采用食用油（0.1 mL/20 g体质量）隔日一次灌胃,共8周;4周组实验1～4周采用上述食用油隔日一次灌胃,实验第5周开始灌胃1%CCl₄食用油混合液（250μL/kg）染毒,隔日一次共4周;8周组实验第1周开始灌胃CCl₄食用油混合液（250μL/kg）染毒,隔日一次共8周。实验8周后及停毒正常饲养2周后采用ARFI技术检测肝内剪切波速,然后处死所有小鼠,收集肝组织,进行HE和天狼猩红胶原纤维染色,观察肝组织病理学变化。结果与对照组小鼠相比,4周组正常饲养2周后肝内剪切波速增加,组织学观察见纤维化形成;而8周组正常饲养2周后肝内剪切波速更高,组织学观察见肝硬化形成。但4周组、8周组染毒结束时肝内剪切波速相似,均明显高于各自正常饲养2周后。结论应用ARFI技术检测的肝剪切波速能反映小鼠肝纤维化变化,但须排除肝内炎性损伤对肝内剪切波速的影响。

摘要: 目的探讨小泛素样修饰物（small ubiquitin-like modifier,SUMO）特异性蛋白酶3（SUMO-specific protease 3,SENP3）对小鼠肺组织细胞自噬的调控作用及分子机制。方法应用免疫荧光技术检测SENP3在肺组织细胞中的定位;对SENP3基因野生型C57BL/6J小鼠(SENP3^+/+)和SENP3基因敲除杂合子小鼠(SENP3^+/-)进行饥饿处理,诱导细胞自噬;应用免疫印迹法评估细胞自噬水平;应用电子显微镜观察和免疫荧光技术分析发生自噬的细胞类型;应用免疫共沉淀方法检测自噬相关分子卷曲螺旋状Myosin样Bcl-2相互作用蛋白1（coiled-coil myosin-like Bcl-2-interacting protein 1,BECN1）的SUMO化修饰。结果 SENP3在肺泡Ⅱ型上皮细胞中高表达。小鼠经饥饿处理后,肺泡Ⅱ型上皮细胞出现自噬现象,且SENP3^+/-小鼠较SENP3^+/+小鼠更明显。同时,肺组织样品中BECN1的SUMO2/3化修饰被SENP3去除。结论 SENP3抑制饥饿应激时小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的自噬,并可对细胞自噬程度进行精细调控。