摘要: 【目的】小金蝠蛾Thitarodes xiaojinensis细胞免疫反应耐受冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis的侵染,是非常独特的宿主昆虫与病原真菌免疫互作的研究模型。本研究旨在明确冬虫夏草菌侵染对小金蝠蛾血细胞形态以及伪足形成相关基因表达的影响,初步解析宿主细胞免疫反应耐受该真菌侵染的机制。【方法】利用扫描电子显微镜技术和激光共聚焦荧光显微技术,分别观察并比较健康小金蝠蛾和感染冬虫夏草菌的小金蝠蛾血细胞的形态差异。通过实时定量PCR技术检测冬虫夏草菌感染前后,宿主血细胞微丝组装相关基因的表达变化。【结果】冬虫夏草菌侵染后,小金蝠蛾血细胞丝状伪足和片状伪足的形成受到抑制;促微丝组装基因DRF显著下调表达(P<0.01),抑制微丝组装基因thymosin显著上调表达(P<0.01)。【结论】冬虫夏草菌侵染后,小金蝠蛾血细胞微丝的组装受到阻碍,导致血细胞伪足的形成受到抑制,进而使得宿主细胞免疫反应耐受该真菌的侵染。

摘要: 小金蝠蛾Hepialus xiaojinensis Tu.是小金县冬虫夏草主要寄主之一。在小金县海拔3850m的自然条件下,完成1代需要4年,以各龄幼虫休眠越冬。每年5月初-7月上旬为蛹期。6月中旬-7月下旬为成虫期,成虫羽化时间多出现在16∶00-20∶30,羽化当晚或次日交配,在18∶30和20∶00有2个交配高峰;交尾后20min可产卵,以当晚至次日晨产卵最多,平均每雌产卵为428粒。6月中旬至8月下旬为卵期。幼虫6龄,主要分布于540cm的土层中;取食嵩草等植物的根或茎的幼嫩部分;最适宜生长的温度为812℃,土壤含水量为45%50%。在自然条件下,各虫态发育历期:卵期为4560d;幼虫期13701385d,其中幼虫休眠期为580695d;蛹期为5065d;成虫期为46d。

摘要: 【目的】本研究旨在鉴定小金蝠蛾Thitarodes xiaojinensis幼虫血细胞类型,统计各类血细胞所占比例并检测其细胞免疫能力。【方法】利用光学相差显微镜观察小金蝠蛾7龄幼虫血细胞,并根据鳞翅目昆虫血细胞特有形态对小金蝠蛾幼虫血细胞进行鉴定;利用96孔板对小金蝠蛾各类血细胞进行计数并计算各类血细胞所占的比例;利用酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae以及Congo Red染色的DEAE-Sephadex A-25凝胶珠刺激小金蝠蛾7龄幼虫,检验其细胞免疫反应。【结果】小金蝠蛾幼虫血细胞由粒细胞、浆细胞、珠血细胞和类绛色细胞组成,所占比例分别为62.5%,26.6%,10.1%和0.8%,未发现典型的原血细胞。酿酒酵母刺激结果显示,小金蝠蛾幼虫血细胞可以发生吞噬以及结节反应。Congo Red染色的DEAE-Sephadex A-25凝胶珠刺激结果显示,小金蝠蛾幼虫血细胞可以发生包囊反应。【结论】小金蝠蛾幼虫血细胞组成及其形态与其他鳞翅目昆虫一致,其中粒细胞所占的比例最高。小金蝠蛾幼虫血细胞对酿酒酵母刺激敏感,可发生吞噬和结节反应,对Congo Red染色的DEAE-Sephadex A-25凝胶珠刺激敏感,可发生包囊反应。小金蝠蛾细胞免疫功能完善。

摘要: 【目的】小金蝠蛾Thitarodes xiaojinensis是冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis的寄主昆虫,生活于高海拔、高寒地区,低温适应性强,但在室温下(2527℃)不能正常存活。本研究检测了热胁迫(27℃)对小金蝠蛾幼虫消化酶及抗氧化系统的影响,以期揭示小金蝠蛾室温不耐受的生理机制。【方法】小金蝠蛾8龄幼虫分两组进行处理:高温组于27℃下饲养,对照组于16℃下饲养。处理24 h后观察虫体状态,并解剖,取中肠及血淋巴。透射电镜观察中肠细胞线粒体结构,分别测定中肠总蛋白酶和糖基水解酶活性,血淋巴丙二醛(MDA)含量,以及血淋巴保护酶系中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)的活性。【结果】两组幼虫中肠总蛋白酶及糖基水解酶活性均随反应温度(1637℃)升高而增强。协方差分析显示,高温组幼虫酶活性极显著低于对照组(P<0.01)。然而,高温组幼虫在27℃下的酶活性与对照组幼虫在16℃下的酶活性无显著差异(P<0.05)。热胁迫下虫体血淋巴中丙二醛含量显著升高(P<0.05),提示出现了氧化损伤。透射电镜结果显示,高温组中肠细胞线粒体肿胀,膜受损,嵴排列混乱,结构破坏。对活性氧起清除作用的3种保护酶中,仅POD活性显著升高(P<0.05),SOD和CAT活性均无显著变化(P>0.05)。【结论】消化酶活性的变化可能不是小金蝠蛾室温不耐受的重要因素;氧化损伤是其热胁迫下不能正常存活的一个重要原因。

摘要: 小金蝠蛾是小金县冬虫夏草产区主要的寄主昆虫之一。为了验证在小金县分布的小金蝠蛾不同类型是否为同一物种,本研究从外部形态、雄性外生殖器构造和分子生物学特性3个方面比较两类小金蝠蛾的差异。结果表明:在小金县冬虫夏草产区分布的小金蝠蛾主要有两类,一类为体表有褐色绒毛,翅脉上斑纹被褐色绒毛覆盖,另一类为黑白斑纹。前者去除褐色绒毛后,两者斑纹相似。两类蝠蛾在雄性外生殖器构造基本一致。线粒体DNA序列(COⅠ)分析表明两者相似度为99.2%以上。因此,在小金县冬虫夏草产区分布的外形不同的小金蝠蛾,实为同一物种-小金蝠蛾的不同生态类型。