摘要: 【目的】克隆小菜蛾Plutella xyostella气味受体Or83b基因,并进行原核表达,为研究小菜蛾寄主选择行为的分子机理,开发昆虫行为调节剂提供基础。【方法】提取小菜蛾的总RNA,反转录获得总cDNA,采用RT-PCR方法扩增目的基因,将其克隆至T载体并测序,然后将目的基因克隆到大肠杆菌Escherichia coli表达载体pET-32a(+)中表达。经酶切、PCR及测序鉴定正确后转化BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE,Western印迹鉴定表达蛋白。【结果】获得了编码小菜蛾Or83b的cDNA序列,该基因阅读框长1 413 bp,编码471个氨基酸,预测的等电点为7.19,命名为PlxyOr83b(GenBank登录号为GQ923610);成功构建了pET-PlxyOr83b原核表达重组质粒,目的基因获得高效表达,其融合蛋白分子量为32.0 kD,Western blot检测结果进一步表明PlxyOr83b在大肠杆菌DE3中得到正确表达。【结论】成功克隆和表达了小菜蛾气味受体基因PlxyOr83b,该基因与其他昆虫Or83b基因基本一致。

摘要: 为探明湘西黑藤Derris cavaleriei藤中对小菜蛾Plutella xylostella幼虫有拒食活性的化合物及其拒食活性,通过活性跟踪、利用柱色谱、借助核磁共振和质谱分离,鉴定了其拒食成分,并使用叶碟法测定各化合物的拒食活性。结果包括:首次从该植物藤中得到4个化合物,即isolonchcarpin,magnificol,ovaliflavanone和millettocalyxin C。其中,化合物isolonchcarpin,magnificol和millettocalyxin C对3龄小菜蛾幼虫均有拒食活性,处理48 h后各化合物的拒食中浓度(AFC_(50))分别是25.5,92.8和115.9 mg/L,提示它们是该植物藤中对小菜蛾幼虫有拒食作用的化合物。阐明这些化合物不仅有助于理解植物与昆虫的关系,而且有助于评估这些化合物防治小菜蛾的潜力。

摘要: 化学防治是世界各地防治小菜蛾Plutella xylostella(L.)的主要方法。选择对小菜蛾各发育阶段高效的杀虫剂有助于很好地控制这一害虫。本研究用浸叶法测定了茚虫威和六伏隆对小菜蛾卵、幼虫和成虫的毒性。茚虫威和六伏隆对小菜蛾卵的LC50值分别为201.40和37.32mg/L。茚虫威和六伏隆对3龄幼虫也有很好的毒性(茚虫威的LC50为4.82mg/L;六伏隆的LC50为1.48mg/L)。对成虫的毒性结果表明,这两种杀虫剂对成虫均没有理想的毒性(茚虫威的LC50为845.20mg/L;六伏隆的LC50为3438mg/L)。根据计算的LC50值,六伏隆对小菜蛾卵和幼虫的毒性比茚虫威高,但是茚虫威对成虫的毒性更高。

摘要: 根据秀丽小杆线虫Caenorhabditis elegans及其他昆虫中糖基转移酶基因的同源序列,采用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增PCR(rapid amplification of cDNA ends PCR,RACE-PCR)技术从小菜蛾Plutella xylostella4龄幼虫中肠组织中获得了3个基因的全长序列,其开放阅读框长度分别为1383bp,1230bp和1041bp,分别编码460,409和346个氨基酸,将其分别命名为Pxbre-3,Pxbre-4和Pxbre-5(GenBank登录号分别是GU321343,GU321344和GU321345)。同源序列比对发现,这些基因和线虫中相应的糖基转移酶基因具有较高相似度,且具有对糖基转移酶活性起关键作用的氨基酸保守模块,也包含类似的跨膜区。由此推测,这3个基因为小菜蛾糖基转移酶基因,参与小菜蛾鞘糖脂的合成。实时定量PCR检测结果表明,这3个基因以及Pxbre-2在小菜蛾4龄幼虫、蛹和成虫以及4龄幼虫中肠组织均有表达,在蛹和成虫阶段表达量较高。本实验结果为今后研究鞘糖脂是否参与小菜蛾对Bt毒素的抗性奠定了基础。

摘要: 为了研究Interruptin B的杀虫活性,初步探讨其杀虫作用机理,本研究采用叶碟法和叶片浸渍法测定了Interruptin B对小菜蛾Plutella xylostella和亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis3龄幼虫的拒食活性和毒杀活性;采用注射法和血球计数法研究对斜纹夜蛾Spodoptera litura幼虫血细胞数的影响;采用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法测定对斜纹夜蛾卵巢细胞(SL细胞)的增殖抑制作用;采用倒置显微镜观察对SL细胞形态、密度和贴壁率的影响。结果显示:处理后48h,Interruptin B对亚洲玉米螟和小菜蛾3龄幼虫的拒食中浓度(AFC50)分别为108.56和143.88μg/mL,致死中浓度(LC50)分别为346.23和194.32g/mL;处理后24h和48h,对SL细胞的抑制中浓度(IC50)分别为13.51和4.11g/mL。Interruptin B处理SL细胞后12-48h,细胞密度随时间的延长而下降,与对照差异显著(P<0.05);处理后3,6,12,24和48h,SL细胞变形率分别为28.18%,83.90%,85.18%,93.93%和100%,细胞贴壁率分别为96.59%,89.90%,83.18%,5.06%和1.09%,处理后6-48h,SL细胞变形率和贴壁率与对照差异显著(P<0.05)。Interruptin B对小菜蛾和亚洲玉米螟3龄幼虫具有良好的拒食和毒杀活性,能显著降低斜纹蛾幼虫血细胞数量,对SL细胞具有良好的增殖抑制作用,可显著降低SL细胞生长密度,改变细胞形态,降低贴壁率,表明该化合物可通过影响昆虫细胞活力毒杀活体昆虫。