摘要: 谷氨酸门控的氯离子通道(glutamate-gated chloride channels,GluCls)或抑制性谷氨酸受体(inhibitory glutamate receptor,IGluR)是阿维菌素类药剂(avermectins)主要的作用靶标,目前人们对于昆虫的IGluR知之甚少。本实验采用RNA干扰(RNAi)技术对小菜蛾Plutella xylostella IGluR的功能进行了初步研究。结果表明:小菜蛾2龄和3龄幼虫中双链RNA(dsRNA)的最佳注射量分别为50.6nL和71.3nL。实时荧光定量(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测结果表明,2龄和3龄幼虫在注射dsRNA 36h和24h后IGluR基因的转录后水平分别下降了32.67%和49.30%。幼虫发生RNA干扰后对阿维菌素的敏感性结果显示,注射了IGluR dsRNA的幼虫死亡率显著低于对照。结果说明,小菜蛾IGluR是阿维菌素的潜在靶标之一,为进一步阐明小菜蛾对阿维菌素靶标抗性机理奠定了基础。

摘要: 【目的】筛选出Bt毒素诱导后的小菜蛾Plutella xylostella(L.)的实时定量PCR最适内参基因。【方法】选取核糖体18S rRNA(18S rRNA)、肌动蛋白(ACTB)、延伸因子(EF1)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、核糖体蛋白L32(RPL32)、核糖体蛋白S13(RPS13)、核糖体蛋白S20(RPS20)和β-微管蛋白(TUB)基因作为候选内参基因,以geNorm、Normfinder和BestKeeper软件分析这8个基因在Bt毒素诱导后的小菜蛾不同品系中肠组织中的表达稳定性。并应用筛选出来的内参基因分析小菜蛾氨肽酶2(aminopeptidase N2,APN2)基因的表达水平。【结果】geNorm软件以RPS13和EF1为最稳定内参基因,NormFinder和BestKeeper软件均以RPS13和RPL32为最稳定基因。使用3种不同内参基因分析Bt毒素诱导后的小菜蛾Bt抗性和敏感品系中ANP2表达水平时,新的内参基因EF1和传统内参基因RPL32表现了良好的稳定性,二者作为标准化因子,ANP2表达量结果基本一致,而使用18S rRNA作为内参基因,却导致部分表达量分析结果有所误差。【结论】筛选出PRS13,RPL32和EF1可以作为小菜蛾某些试验条件下的内参基因,对小菜蛾基因表达研究奠定了一定基础,也对其他昆虫内参基因的筛选具有参考价值。

摘要: 为阐明小菜蛾Plutella xylostella不同地理种群的遗传多样性,应用ISSR技术对我国小菜蛾8个地理种群的遗传多样性进行了研究分析。15条引物扩增出395条ISSR条带,其中多态性条带占89.11%,全部个体显示了各自独特的ISSR图谱。ISSR标记的遗传多样性分析结果表明:小菜蛾无论在物种水平上(P=89.11%,H=0.2706,I=0.4286),还是在种群水平上(P=88.80%,H=0.2759,I=0.4349)都表现出较高的遗传多样性。其中,北京南口种群内遗传变异最大,海南海口和甘肃兰州种群内遗传变异最小,南方地区(云南、湖北)小菜蛾种群遗传多样性明显高于北方地区(北京、天津、山东、黑龙江、甘肃)种群。据种群变异来源分析,有5.66%的遗传变异来自种群间,94.34%的变异来源于种群内(N_m=8.3399),不同地理种群间没有明显的遗传分化。本文有关小菜蛾不同地理种群基因流动和遗传变异的研究为小菜蛾抗药性的控制及田间种群的综合防治提供了有价值的分子生物学依据。

摘要: 采用时间动力学法对小菜蛾Plutellaxylostella酪氨酸酶的最适反应条件、对抑制剂的敏感度以及发育期变化规律进行了研究。结果表明 :小菜蛾酪氨酸酶反应的最适pH值为 6 4 ,反应线性时间为 0 2min ,在 2 2℃和 4℃下其活性分别可保持 12h和 72h ,在 - 2 0℃下至少可保持 7天。不同发育阶段小菜蛾酪氨酸酶活性的大小依次为预蛹 >4龄幼虫 >蛹 >1龄、2龄、 3龄幼虫 >成虫。苯基硫脲 (phenylthiourea ,PTU)对小菜蛾阿维菌素抗性品系和敏感品系酪氨酸酶活性的抑制中浓度 (I50 )值分别为 1 1796 μmol L和 1 2 795 μmol L ,二者无明显差异

摘要: 对菜蛾盘绒茧蜂Cotesiaplutellae多分DNA病毒的特性及其对寄主小菜蛾Plutellaxylostella幼虫的生理效应进行了研究。结果表明 :菜蛾盘绒茧蜂雌蜂输卵管萼中含有大量的多分DNA病毒 (polydnavirus ,PDV) ;一个PDV内含多个核衣壳 ,最多可达 16个 ;核衣壳长 4 0 16 8nm ,直径 39 4 0nm ;PDV仅在输卵管萼细胞内复制 ;雌蜂产卵时 ,随蜂卵将PDV注入寄主血腔 ,并扩散到寄主的许多组织中 ;PDV可能先通过脱膜再侵染寄主组织。雌蜂经Co6 0 辐射处理后再寄生 (即假寄生 )小菜蛾 2龄、 3龄和 4龄初期的幼虫 ,被寄生后的寄主幼虫几乎全部不能化蛹 ,但末龄 (即 4龄 )幼虫期显著延长 ,并在寄生后期 ,幼虫胸部有褐色的短翅芽出现 ;即将化蛹的 4龄末小菜蛾幼虫被假寄生后 ,即使每头寄主被过寄生 9次 ,依然能正常化蛹 ,但不能羽化。假寄生与正常寄生后寄主的脂肪体数量和形态结构有明显的不同 ,推测在正常寄生的情况下蜂卵孵化时释放的畸形细胞及随后的幼蜂可能对脂肪体的结构产生了作用。