摘要: 为寻找凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死综合症(AHPNS)重要致病菌——副溶血弧菌的高效低毒消毒剂,选取了包括苯扎溴铵、聚六亚甲基胍盐酸盐(PHMG)等22种水产或医学上常用的消毒剂,比较分析其对副溶血弧菌的杀灭效果。悬液定量杀菌试验发现, 22种消毒剂中PHMG对副溶血弧菌的杀灭效果最好。接着,进一步分析PHMG的有效杀菌浓度,结果显示, PHMG浓度达到0.2 mg/L时作用48h即能100%地杀死副溶血弧菌。对7种常见病原菌和凝结芽孢杆菌的杀灭试验显示, PHMG对弧菌的杀灭效果最好, 0.5 mg/L PHMG能100%地杀灭四种弧菌,对迟钝爱德华菌、嗜水气单胞菌和海豚链球菌的杀灭效果较差,对凝结芽孢杆菌的杀灭效果最差。急性毒性试验得出PHMG 24h的LC50=80.28 mg/L; 48h的LC50=23.32 mg/L,安全浓度SC=0.59 mg/L。对攻毒副溶血弧菌凡纳滨对虾的保护试验显示, PHMG浓度达到0.5 mg/L时, 24h对对虾的相对保护率达(77.78±5.01)%左右,且与三个高浓度组相对保护率差异不显著。随着PHMG浓度的升高,凡纳滨对虾肝胰腺所含副溶血弧菌数量明显减少, 48h后1.1及1.4 mg/L组副溶血弧菌数量降为0。降解试验结果显示:0.5 mg/L的PHMG在第5、第6天浓度有所下降, 1 mg/L的PHMG在试验7d中基本保持稳定。研究证明了PHMG具有高效、低毒、低降解的特性,是防治凡纳滨对虾AHPNS的理想消毒剂。

摘要: 为了解析miRNA及靶基因在凡纳滨对虾低温适应过程中的分子调控机制,研究开展了凡纳滨对虾常温(28℃)及低温锻炼(16℃, 6d)下肝胰腺小RNA文库的测序和分析。从常温对虾的小RNA文库测序获得18—32 nt的高质量序列10690259条,鉴定出已知的成熟miRNAs 57条;而从低温锻炼对虾的小RNA文库获得18—32 nt的高质量序列序列8587144条,鉴定出已知的成熟miRNAs 48条。分析获得25个在低温锻炼下呈显著差异表达的miRNAs。运用qRT-PCR验证了3条低温下差异极显著的miRNAs的表达模式。结果显示, 3条miRNAs的表达模式与高通量测序结果基本一致。预测低温差异表达miRNAs的靶基因,并与转录组分析获得的低温显著差异表达基因进行比对,从二者重合的基因集中挑选出4个基因,即nuclear export mediator factor Nemf-lik、synapse-associated protein、seleno proteins以及DEAD-box RNA helicase Variant 1,运用qRT-PCR验证其在不同条件低温锻炼凡纳滨对虾肝胰腺中的表达规律,为解析miRNAs及其靶基因在对虾低温适应过程中的分子调控机制提供了基础数据。

摘要: 为了解凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)育苗期水体中3种生物絮团的形成过程、水质净化效果、菌群结构及功能,实验通过测定各组絮团含量和水质指标并采用Illumina MiSeq高通量测序技术,比较葡萄糖组、淀粉组和蔗糖组生物絮团的不同特征。结果显示,各组形成的生物絮团可有效调节水质,降低水体中的氨氮和亚硝酸盐氮水平。在3个碳源添加组水样中氨氮、亚硝酸盐氮和硝酸盐氮浓度显著低于对照组(P<0.05),在不同碳源组中淀粉组的氨氮、亚硝酸盐氮和硝酸盐氮的浓度显著高于葡萄糖组和蔗糖组(P<0.05);淀粉组的生物絮团沉降体积(BFV)显著低于葡萄糖组(P<0.05),蔗糖组BFV最高, 3组粒径大小呈现:蔗糖组>葡萄糖组>淀粉组; 3组样品分别测得553、515和542个OTU,菌群丰度指数Chao1、Shannon值葡萄糖组>蔗糖组>淀粉组。各组菌群在门水平中,以变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和浮霉菌门(Planctomycetes)为各组优势菌门, 3个菌门在各组中占比分别达到91.7%、97.6%和88.7%。在属级水平中,葡萄糖组中Oceanicella属为优势菌属,占比最高为18.4%,淀粉组中丰度较高的Muricauda、Cyclobacterium属,占比分别为9.8%和5.9%,均高于葡萄糖组和蔗糖组。在蔗糖组中Rhodopirellula属具有较高占比,较葡萄糖组和淀粉组分别高1.8%和4.1%。通过Tax4Fun法在3组中检测到细胞新陈代谢、遗传信息加工和环境信息处理等基因功能。这些功能基因在葡萄糖组中的丰度均高于蔗糖组和淀粉组。各项结果表明,凡纳滨对虾育苗水体中生物絮团不仅可以净化水质,还能提高水体菌群多样性,其中以葡萄糖作为碳源效果最好,生物絮团技术对于维持水质与水体生态系统平衡具有重要意义。

摘要: 基于斑节对虾(非洲群体)(Penaeus monodon)肠道菌的生理生化特性,为解决斑节对虾急性肝胰腺坏死综合征(AHPND)提供新思路,文章分离纯化健康斑节对虾肠道中的优势菌株;以致病性哈维氏弧菌为指示菌,用牛津杯法从纯化菌株中筛选拮抗菌;通过生理生化特征、Biolog系统鉴定及16S rDNA技术综合方法对菌株进行鉴定;通过药敏实验,评价拮抗菌株的安全性;绘制高敏拮抗菌株的生长曲线,得出其生长特性;通过测定其产酶活性,形成对其益生机制的初步推断。从斑节对虾肠道中共分离得到14株的优势土著菌,分别标记为P.m-1、P.m-2······P.m-14,经过拮抗实验得到了3株拮抗菌(P.m-1、P.m-9和P.m-13)。经鉴定P.m-1、P.m-9和P.m-13分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)。药敏实验结果表明, 3株拮抗菌均不属于耐药菌, P.m-1对药物高度敏感。生长特征实验表明:P.m-1在2h进入对数期, 10h达到生长高峰,菌体密度可达1.14×10~9 cfu/mL,表现出了强劲的生命力。经过蛋白酶活性测定,P.m-1具有较强的产酶能力。优势菌P.m-1具有成为益生菌的潜力,后续将作为功能性饲料添加剂或水质调节剂进行应用,为AHPND进行生物防治提供新思路。

摘要: 为研究B淋巴细胞瘤-2 (B-cell lymphoma, Bcl-2)基因在内源性细胞凋亡通路中发挥的重要调控作用,实验利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得日本对虾(Marsupenaeus japonicus)MjBcl-2基因cDNA全长序列,并对其序列进行生物信息学分析;利用实时定量PCR (qPCR)技术分析了MjBcl-2在不同组织、不同水温胁迫及RNA干扰后的表达水平;同时利用TUNEL技术,检测MjBcl-2干扰后的细胞凋亡情况。结果显示:日本对虾MjBcl-2 cDNA全长为2432 bp,开放阅读框长度为726 bp,共编码241个氨基酸,分子量为26.80 kD;结构域预测分析表明MjBcl-2含有Bcl-2家族典型的保守结构域;多序列比对以及进化树构建结果表明, MjBcl-2与其他物种的相似度较高,保守性较强。定量PCR结果显示, MjBcl-2在日本对虾各个组织中均有表达,肌肉中表达量最高,鳃次之,心脏中表达量最低。低温(10℃和16℃)胁迫下日本对虾鳃和肝胰腺Bcl-2基因的表达量逐渐上升,在72h到达最高点;在干扰Bcl-2基因后,各个温度Bcl-2基因的表达量均下调,细胞凋亡基因Caspase-3的表达量显著上调(P<0.05)。TUNEL检测结果表明, RNAi组和NC组(对照组)随着温度的降低,凋亡细胞数量不断增加,在28℃处理组中有少量凋亡细胞, RNAi组与NC组凋亡细胞的数量没有明显的变化,在10℃低温处理组中, RNAi组凋亡细胞的数量明显高于NC组; 12h后, 28℃NC组、28℃RNAi组、10℃NC组和10℃RNAi组中鳃组织的细胞凋亡率分别为1.73%、2.35%、21.59%和33.70%。研究表明, MjBcl-2在日本对虾应对低温胁迫中发挥重要作用。