摘要: 根据同源性设计特异性引物,采用RT-PCR方法扩增出了家蝇Muscadomestica2种气味结合蛋白基因cDNA片段,大小分别为381bp和353bp,分别命名为MdomOBP1(GenBank登录号AY730350)和MdomOBP2(GenBank登录号AY730351)。测序分析结果表明,它们具有气味结合蛋白的标志性结构域。对这2个片段推导的氨基酸序列进行同源性分析,结果表明两者与已报道的双翅目昆虫的气味结合蛋白的同源性分别达57%88%和52%91%。

摘要: 考察了凝胶过滤介质、层析柱直径、柱床高度和洗脱流速对家蝇Muscadomestica蛋白粗提液分离效果的影响 ,结果表明 :凝胶过滤介质种类、层析柱直径、柱床高度、洗脱流速均能不同程度地影响家蝇蛋白粗提液的分离效果。在实验范围内 ,选择1 3cm直径、4 0cm柱床高度的SephadexG 75 ,以 0 4mL min的流速洗脱时 ,对家蝇蛋白粗提液的分离效果比较理想。

摘要: 利用不同条件提取诱导过的家蝇Muscadomestica 3龄幼虫的总蛋白 ,并用平板扩散法测定所得蛋白粗提液的抗菌活性。结果表明 ,收集幼虫时的处死温度、沸水浴时间及提取液的pH值均对家蝇幼虫粗提液的抗菌活性有明显的影响。

摘要: 通过体壁损伤和大肠杆菌同时诱导家蝇幼虫产生免疫血淋巴 ,经沸水浴热变性 ,透析浓缩处理 ,然后经Tricine SDS PAGE得到诱导前后家蝇幼虫血淋巴中蛋白差异表达条带 ,将该条带电泳回收、复性、抗菌活性检测等步骤 ,分离纯化得到抗菌肽MDL 1,其分子中富含Gly和碱性氨基酸 ,分子量为 62 0 0D ,对革兰氏阴性菌Escherichiacoli有较强抗性。通过MDL 1对大肠杆菌通透性分析和透射电镜超微结构观察表明 ,MDL 1首先可能与细菌的外膜结合 ,然后与细胞内膜作用 ,扰乱膜脂分子的排列 ,改变细胞膜的通透性 ,从而影响细胞膜的结构和功能 ,使细胞膜形成的许多孔道 ,造成细胞内的原生质扩散 ,并从孔道向胞外渗漏 ,影响了细菌的代谢系统 ,最终引起细胞膜破碎 ,细胞完全解体 ,从而起到抑菌杀菌作用

摘要: 为了研究Caspases家族在昆虫发育变态中的作用,通过RT-PCR扩增并结合RACE技术,克隆得到家蝇Muscadomestica Caspase-1基因1条,命名为Mdom-Caspase-1(GenBank中cDNA序列号为EU854472,氨基酸序列号为ACF71490)。该基因全长1295bp,阅读框序列870bp,共编码289个氨基酸,理论分子量32.83kDa,等电点8.67。Mdom-Caspase-1蛋白有5个保守的半胱氨酸位点QACQG,具有Caspase的典型特征;整个分子呈现亲水性,有8个区域共89个氨基酸为亲酯性,蛋白质二级结构主要由11个α螺旋区、7个β-折叠区、17个β-转角区组成。昆虫间Caspase-1分子具有明显的保守性,Mdom-Caspase-1与黑腹果蝇Drosophila melanogaster、埃及伊蚊Aedes aegypti和致倦库蚊Culex quinquefasciatus的Caspase-1氨基酸序列相似性为65%77%。RT-PCR半定量分析结果表明,Mdom-Caspase-1基因在家蝇各个虫态中均有表达,但在卵期、3龄幼虫、预蛹、蛹和羽化5d的雌虫中的表达量明显高于其他虫态。这些结果提示Caspase-1可能与昆虫发育变态关系密切,为进一步研究昆虫Caspase-1功能、设计Caspase-1抑制剂提供了分子基础。