摘要: 家蝇是重要的卫生害虫,拟除虫菊酯杀虫剂的广泛使用导致了家蝇抗药性的产生,家蝇种群演化出了多重的抗性等位基因。为推测抗性等位基因在无杀虫剂选择压下是否存在适合度代价,对来源于野外的北京家蝇种群(BJ2010)连续饲养25代,在不接触杀虫剂的实验室条件下,每隔5代检测基因型频率,测定该种群的钠离子通道等位基因和CYP6D1基因频率随时间的变化。研究结果显示,与拟除虫菊酯抗性相关的钠离子通道抗性等位基因kdr-his和CYP6D1v1频率值随时间有一定的波动,但没有显著的变化,说明kdr-his和CYP6D1v1等位基因在无杀虫剂选择压下不存在明显的适合度代价。另一钠离子通道抗性等位基因kdr起始频率很低,其频率的最终减低可能是由于遗传漂变的结果。因此,伴随拟除虫菊酯杀虫抗药性出现的抗性等位基因在BJ2010品系家蝇中并不表现适合度劣势,提示家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性一旦形成,将难于自然消减。

摘要: 本文初步探究不同浓度家蝇幼虫抗菌肽对FBL-3红白血病原代细胞增殖的影响。采用诱导、研磨、离心、C18固相萃取等方法制备家蝇幼虫抗菌肽混合物,然后处理传代期的FBL-3细胞,调整浓度为2.25×106/m L并通过尾静脉注射C57BL/6小鼠,建立红白血病动物模型。待肿瘤生长较大时,处死并剥离肿瘤,再通过研磨、裂红液裂解、获取原代肿瘤细胞并培养。将抗菌肽混合物调整为不同浓度作用于传代期的FBL-3原代细胞,之后经倒置显微镜观察照相,台盼蓝染色试验计算死亡率、CCK-8试剂盒做细胞毒性检测。结果显示抗菌肽混合物浓度为250～350μg/m L作用FBL-3原代细胞时,细胞碎片大量增多,死亡率增高,细胞毒性变大。初步证明了抗菌肽混合物在250～350μg/m L抑制细胞增殖效果明显,在300μg/m L浓度下抑制作用最强,本研究结果可作为动物模型体内实验的参考。

摘要: 将家蝇三龄幼虫抗菌肽粗提物利用反相高效液相色谱仪(RP-HPLC)进行分离纯化,得到8种与对照组有差异的蛋白分别命名为I1、I2、I3、I4、G1、G2、G3、G4组。通过CCK-8试剂盒检测发现,其中有4种蛋白及粗提物(E0组)对sup-b15细胞有增殖抑制作用,生存率均值分别为I1:0.714、I2:0.785、I4:0.641、G2:0.686、E0:0.561。采用流式细胞仪检测其诱导凋亡的效果,其凋亡率均值分别为I1:16.73、I2:9.79、I4:18.60、G2:11.85、E0:35.94。对比发现,粗提物(E0)对sup-b15细胞的抑制率明显高于纯化物,证明粗提物较纯化物对肿瘤细胞抑杀作用更为明显,间接的说明各种纯化蛋白之间具有某些协同作用。

摘要: 采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法,分析家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2体外生长增殖与凋亡的影响,用倒置光学显微镜检测defensin对人肝癌细胞HepG2和人正常心肌细胞H9C2生长增殖情况的影响,并采用流式细胞术检测defensin对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示,家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的生长有抑制作用,对人正常心肌细胞H9C2无抑制作用。通过显微镜观察HepG2细胞凋亡的形态变化,MTT检测发现defensin对肿瘤细胞的增殖抑制率呈剂量反应关系和时间反应关系。defensin能诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡,并且影响人肝癌细胞HepG2的细胞周期。家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2具有增殖抑制作用及凋亡作用,对正常人心肌细胞H9C2基本无抑制作用。

摘要: 乙酰胆碱酯酶(AchE)是有机磷和氨基甲酸酯杀虫剂的主要作用靶标,该酶氨基酸残基的替换可以降低AchE对这两类杀虫剂的敏感性,从而使昆虫表现出对这两类杀虫剂的抗性。至今在抗性家蝇AchE中鉴定出多个不同位点的点突变,以G262A/V和F327Y突变最为普遍。262和327两位点上的氨基酸残基靠近AchE的活性位点三联体,G262A/V和F327Y替换可以通过改变起催化作用的丝氨酸的定位或通过降低酰基-结合袋的空间来改变酶的活性,在抗性进化过程中起着重要的作用。家蝇AchE点突变的效用是累加,多突变组合往往导致更高水平且更广谱的抗性。从不同抗性家蝇种群中检测出相同的AchE遗传突变,表明这一抗性进化机制的保守性;多种抗性等位基因共存于家蝇种群中,反映了杀虫剂使用的多重性。家蝇乙酰胆碱酯酶抗性等位基因种类分布因地区而不同,但也有重叠。家蝇种群表现出抗性等位基因的演替,推测是杀虫药剂的轮替使用的结果。