摘要: 目的分析家蝇幼虫免疫诱导前后血淋巴中的免疫防御相关靶标,探索其先天性免疫机制。方法采用同位素标记及相对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)结合2D LC-MS/MS对家蝇幼虫诱导前后的血淋巴蛋白质组进行研究。结果与对照组比较研究后共获得237个不同肽段,鉴定到13个具有定量信息的差异蛋白。免疫刺激后显著上调的蛋白有9个,下调蛋白4个(P<0.05),对鉴定到的差异蛋白进行理化性质分析和GO(gene ontology)注释分析,发现这些蛋白分别具有抗菌、抗氧化、催化结合等功能,并参与了免疫、代谢、应激、转运等生物学过程,表明对家蝇幼虫经诱导后血淋巴中多种功能蛋白的表达发生了变化。结论 iTRAQ标记技术结合2D LC-MS/MS可以有效地分离鉴定昆虫血淋巴蛋白质组,为深入研究差异蛋白的功能奠定了基础。

摘要: 为检测家蝇对拟除虫菊酯击倒抗性kdr等位基因上的L1014F点突变,采用了寡核苷酸探针法(PCR-AlleleSpecificOligonucleotideprobe,PCR-ASO),用于检测该点突变。对L1014位的上下游DNA进行PCR扩增,并将纯化产物平行点样在带正电荷的尼龙膜上,用2条地高辛标记的特异性寡核苷酸探针,1条为敏感型,1条为突变型,与之杂交,根据显影的阳性信号判断待检样品的kdr等位基因型。该方法能区分敏感纯合子、抗性纯合子及杂合子,是检测家蝇kdr抗性的有用工具。

摘要: 细胞色素P450单加氧酶系是一类广泛分布在生物有机体中的重要酶系,具有多样的功能。细胞色素P450介导的杀虫剂代谢解毒作用的增强是昆虫对杀虫剂产生抗性的普遍机制。为揭示家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂的分子基础,我们利用mRNA差异显示技术(DDRTPCR)从溴氰菊酯抗性品系家蝇Muscadomestica中分离出2个新的基因片段(M1,M2)。序列比对(BlastP)结果表明,M1与黑腹果蝇Drosophilamelanogaster中的Cyp6A9在氨基酸水平上具有54%的相似性,M2分别与果蝇Drosophilasimulans中的Cyp6g1有65%的相似性。M1和M2包含P450的特征序列,并与细胞色素P450具有最高程度的序列相似性,是为细胞色素P450基因片段。

摘要: 综述了近年来家蝇抗药性分子机制的研究进展。脂族酯酶基因(MdaE7)在位置137(Gly)和251(Trp)的氨基酸突变可能与家蝇对有机磷抗性有关;谷胱苷肽S转移酶(GSTs)超量表达在家蝇对有机磷农药的抗性中起重要作用;有机磷抗性家蝇的AChE基因普遍存在Gly262Ala和Phe327Tyr突变。击倒抗性(kdr)和P450介导的代谢抗性是家蝇对DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂抗性的重要机制,电压门控钠离子通道的L1041F突变产生Kdr,而M918T和L1041F双突变导致超击倒抗性(superkdr);P450介导的代谢抗性表现出进化可塑性的特点。有关家蝇抗性机制的阐明,可为抗性的检测和监测提供准确和方便的手段。

摘要: 根据家蝇拟除虫菊酯kdr (knockdownresistance)抗性的遗传标记L10 14F突变 ,设计竞争特异性等位基因PCR扩增方法 (cPASA ,competitivePCRamplificationofspecificallele) ,用于检测单头家蝇基因组中的kdr点突变。通过对 1个实验室敏感种群及 8个野外种群共 4 5 0个个体的kdr等位基因型检测 ,结果表明kdr等位基因频率与溴氰菊酯LD50 值之间有线性正相关回归关系 (Γyx =0 913,P =0 0 0 0 6 )。遗传学分析表明各种群kdr等位基因频率处于Hardy Weinberg平衡状态 ,遗传差异的无偏估计值表明 ,各种群间等位基因及基因型频率有显著差异