摘要: 家蝇(Musca domestica)是重要的医学媒介昆虫,是许多病原体传播的机械媒介和生物媒介.为了研究家蝇中肠内微生物的群落结构,了解家蝇在疾病传播中的作用,构建了家蝇中肠细菌的16S rRNA基因克隆文库.文库包括88条序列,分别属于22个操作分类单元(OTUs),其中12个OTUs属于变形菌门(Proteobacteria),9个OTUs属于厚壁菌门(Firmicutes),1个OTU属于拟杆菌门(Bacteroidetes).变形菌门中,Gammaproteobacteria有10个OTUs,Betaproteobacteria和Epsinoproteobacteria各1个OTU,未发现Alphaproteobacteria和Deltaproteobacteria.厚壁菌门中,6个OTUs属于Lactobacillales,1个OTU属于Clostridia,2个OTUs属于Bacillales.文库中Gammaproteobacteria有71条序列,占总序列数的80.7%,是优势种类.文库中的肠杆菌属(Enterobacter)、克雷伯菌属(Klebsiella)、普罗威登斯菌属(Providencia)、变形杆菌属(Proteus)、气单胞菌属(Aeromonas)和葡萄球菌属(Staphylococcus)中的许多种类都是条件致病菌和致病菌.研究结果将有助于了解家蝇在疾病传播中的作用.

摘要: 为了解家蝇能否降解利用纤维素,采用DNSA法检测家蝇幼虫纤维素酶活性及酶学特性;并进一步研究纤维素酶活性与家蝇发育的关系.结果显示,在生长发育的不同时期,家蝇都具有滤纸酶活性,活性范围为0.85(±0.035)IU mg-1至10.45(±0.050)IU mg-1;家蝇纤维素酶的组成包含3种酶,即β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BG)、内切β-1,4-葡聚糖酶(Endo-β-1,4 glucanase,EG)和外切β-1,4-葡聚糖酶(Exo-β-1,4-glucanase,CBH).在pH 5.6的条件下,这3种酶的最适反应温度和时间分别为50℃和60 min,在体外具有较强的热稳定性,50℃放置1 h后仍可保持较强的酶活性.纤维素酶活性随着家蝇的发育逐渐增高(P<0.05),卵的酶活性最低,成虫的酶活性最高,在最适反应条件下,成虫BG、EG和CBH的活性分别为(7.96±0.065)IU mg-1、(9.76±0.080)IU mg-1和(10.86±0.091)IU mg-1.这3种酶的活性在家蝇卵、幼虫、蛹和成虫4个发育阶段,均是CBH最高,BG最低.增加家蝇幼虫饲料中粗纤维的含量,3龄幼虫的纤维素酶活性明显提高(P<0.05),而平均体重和体长与对照组比无显著差异(P>0.05).研究表明家蝇具有完整的降解利用植物纤维素的酶系,其纤维素酶活水平与家蝇的发育密切相关.

摘要: 几丁质酶是昆虫几丁质降解过程中的重要酶类,在昆虫整个生长发育过程中发挥着重要作用.为筛选及挖掘与防治有害医学昆虫相关的分子靶标,根据家蝇几丁质酶2(Musca domestica chitinase 2,MdCht2)基因序列设计并合成双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),采用微量注射法向家蝇2龄幼虫导入dsRNA,对对照组及干扰组的样本进行转录组测序,筛选差异表达基因,进行GO(gene ontology)功能注释和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析.结果显示,注射dsRNA 24 h后,幼虫MdCht2 mRNA的表达显著下降,提示导入的dsRNA干扰了MdCht2的表达.经转录组测序,与对照组相比,显著差异基因共213条,其中78条基因为上调表达,135条基因为下调表达.随机选取8条显著差异基因通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进行验证,该结果与转录组结果趋势一致.根据功能注释发现这些差异基因与生长发育、脂类代谢、免疫调控等途径相关.本研究通过RNA干扰和转录组测序技术处理家蝇获得大量差异基因,结果可为后续几丁质酶相关基因的挖掘和鉴定及功能研究提供一定的数据基础.(图7表4参46)

摘要: 家蝇是公共卫生和畜牧业的重要害虫，抗药性已成为家蝇有效控制的重要障碍。以往的研究表明，家蝇羧酸酯酶MdαE7某些位点的突变可以导致对有机磷和拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性，但我国家蝇种群MdαE7基因突变的类型、分布和不同等位基因的分子进化关系等相关信息还非常缺乏。本研究检测了我国5个省份家蝇样品的羧酸酯酶MdαE7基因突变的类型和分布状况，并对普遍存在的251位点突变的进化做了起源分析。结果表明，我国家蝇普遍存在MdαE7 G137D和W251L/S抗性突变，不同地区的抗性等位基因频率有所不同。除了常见的G137D和W251L/S外，在我国家蝇中还发现了4个其他氨基酸替换，即Y148F、P157S、S250T和E273D。基于55条MdαE7基因片段的DNA序列，鉴定出8种不同的单倍型。单倍型的分子进化分析表明MdαE7 251位点的突变具有不同的进化起源。

摘要: 家蝇是多种人与动物疾病的传播媒介，化学防治是家蝇防治的重要手段之一，但杀虫剂抗性是家蝇化学防治的一大障碍。以往的研究表明，乙酰胆碱酯酶(由Ace基因编码)的某些点突变与家蝇对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂抗性相关。在我国野外家蝇群中发现了可以导致抗药性的乙酰胆碱酯酶V260L、G342A、G342V和F407Y氨基酸置换，但对其进化起源模式尚缺乏认识。本研究采用基因片段测序的方法，获得了来自北京、山东、上海、广东4个省份的728头家蝇的Ace基因片段序列，从中鉴定出9种不同的Ace单倍型。分子系统树和网络图分析发现了V260L、G342A和F407Y突变的多起源性，4种三位点突变(L-A-Y)的单倍型源自两条不同的进化途径。