摘要: 制备家蝇Musca domestica幼虫血淋巴中的抗真菌肽,对其分子特性及抗真菌机制进行研究。通过C18柱固相萃取、反相高效液相色谱相结合的方法,成功制备到家蝇幼虫血淋巴抗真菌肽MAF-1。SDS-PAGE分析结果表明,MAF-1的分子量为17.136kDa。通过圆二色谱测出水溶液中MAF-1主要以α螺旋及β折叠为主。扫描电镜观察结果显示,MAF-1作用白假丝酵母菌Candida albicans1h后,部分真菌出现表面凸凹不平,细胞结构模糊;随着作用时间的延长,表面形成很明显的凹陷,皱缩,个别菌体破裂,内容物外泄,病变真菌发生率高于对照组。单细胞凝胶电泳(single-cell gel electrophoresis,SCGE)结果显示,正常对照组的真菌呈现典型的圆形,而实验组则出现明显的拖尾现象即形成"彗星"样细胞特征,细胞迁移距离明显高于对照组。SDS-PAGE图谱显示,MAF-1作用后的白假丝酵母菌菌体蛋白谱带一些条带明显变浅,条带数下降,甚至消失。结果提示MAF-1可能具有独特的抗真菌机制。

摘要:

摘要: 家蝇防御素是从家蝇中克隆得到的1种抗菌肽。为了进一步研究家蝇防御素的功能和制备特异性抗体,采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法, 进行了家蝇防御素原核表达的研究。根据克隆到的家蝇防御素基因(Mdde) 的cDNA序列, 设计特异性引物, PCR 扩增成熟肽的cDNA片段, 将成熟肽序列重组到表达载体pGEX 4T 1中, 构建m Mdde/pGEX 4T 1重组表达载体, 在大肠杆菌BL21 中诱导表达, 重组表达的融合蛋白GST Mdde占菌体总蛋白的33 4%。纯化得到GST Mdde后, 再用凝血酶将其从特定位点切开, 得到表达的m Mdde。液体抑菌实验结果初步表明, 表达的融合蛋白GST Mdde对细菌生长有一定的抑制作用。利用纯化的GST Mdde融合蛋白, 制备了抗血清。

摘要: 超氧阴离子(O_2~-)是生物体内的主要自由基。自由基与很多大分子如脂质、蛋白质及核酸等反应,破坏细胞的结构,干扰细胞的功能,根据Harman 的自由基理论,最终导致有机体的衰老和死亡。超氧化物歧化酶(SOD)促进O_2~-的歧化反应,对机体起保护作用,因此认为它与寿命有关。荧光哀老色素(FAP)又叫脂褐素,被认为是自由基诱导的不饱和脂肪酸和其他大分子如:蛋白质、核酸等氧化的终产物。它的含量被看成是发

摘要: 本文对二氯苯醚菊酯和溴氰菊酯分别选择的高抗性家蝇(Musca domestica vicina)品系2Cl-R及Dec-R的抗性机制进行了研究。应用生物测定、增效剂,体内试验的表皮穿透作用、离体条件的解毒酶系活性的增加以及家蝇头部ATP酶活力的研究结果表明,两种拟除虫菊酯高抗性家蝇品系的表皮穿透性均比正常品系NP为慢,特别是Dec-R品系极慢。酯酶和多功能氧化酶及其末端的细胞色素P-450的活性在两个抗性品系中都比NP品系有不同程度的增高,但2Cl-R品系以氧化酶为主,而Dec-R品系似以酯酶占优势。Dec-R品系的Na~+—K~+-ATP酶活力低于NP品系的46％,而2Cl-R品系与NP品系相等。Mg~(2+)-ATP酶活性在两个抗性品系中均高于正常品系。Mg~(2+)-ATP酶可能也是拟除虫菊酯的一个重要靶标部位。