摘要: 化学感受蛋白(chemosensory proteins,CSPs)是昆虫体内存在的一类主要识别和运载非挥发性的气味分子和化学刺激物的可溶性蛋白。本研究运用半定量RT-PCR方法分析了BmCSP4的时空及组织表达谱。结果表明:BmCSP4在家蚕Bombyx mori各发育阶段均表达,但表达量从4龄到蛹期逐渐减少,且在雌成虫头部、胸部和腹部表达量较少。用1-NPN作为荧光探针,测定了15种外源配基与BmCSP4蛋白的结合特性,结果显示:仅芳香醛类和芳香酮类化合物在浓度10μmol/L能将1-NPN从BmCSP4中替换50%,苯甲醛解离常数为3.20μmol/L,对甲氧基苯甲醛解离常数为2.24μmol/L,2-戊基-3-苯丙基-烯醛解离常数为2.88μmol/L,1-苯基-1-丁酮解离常数为2.04μmol/L,苯乙酮解离常数为2.52μmol/L。据此推测,BmCSP4在不同的发育阶段执行不同的生理功能,并可能参与对芳香醛、芳香酮类气味识别过程。

摘要: 【目的】了解家蚕Bombyx mori维生素B6关键代谢酶磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine-5'-phosphate oxidase,PNPO)基因在家蚕不同发育阶段及5龄幼虫不同组织中的表达差异。【方法】将家蚕PNPO基因的重组表达质粒pET-22b(+)-PNPO转化入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta中诱导表达,纯化蛋白制备多克隆抗体。分别采用荧光定量PCR和Western blot方法对家蚕PNPO基因进行了转录水平和翻译水平的表达分析。【结果】在家蚕发育水平上,5龄幼虫的PNPO翻译量为最高。PNPO基因在5龄幼虫各组织中的转录水平由高到低依次为精巢、头、中肠、马氏管、卵巢、表皮、脂肪体、丝腺;翻译量也以精巢为最高,其次是头、中肠和马氏管。【结论】明确了PNPO在家蚕各发育阶段及5龄幼虫各组织中的表达情况。

摘要: 细胞色素P450(P450s,CYPs)超基因家族是由数量众多、功能复杂的一类血红蛋白酶基因所组成,对许多结构多样的外源与内源化合物起着氧化代谢的作用。本文系统地综述了家蚕Bombyx mori基因组中P450s的数量与种类,其数量比食腐昆虫和杂食性的植食昆虫少,但比意大利蜜蜂Apis mellifera多,在基因组中大多呈串联重复排列,基因结构与系统进化树之间有着紧密的联系。家蚕与黑腹果蝇Drosophila melanogaster P450s的比较基因组学分析发现,存在10对直向同源基因,但CYP3与CYP4集团(Clan)的P450s表现出种属特异性扩增。家蚕P450s与其蜕皮激素和保幼激素合成代谢有关,并涉及到对氟化物与杀虫剂抗性。家蚕作为鳞翅目昆虫的代表,通过对其P450s的研究,可望为其他昆虫,特别是鳞翅目昆虫的生长发育研究和抗性治理提供理论依据和研究模式。

摘要: RNA和输出因子结合蛋白(RNA and export factor binding proteins,REF/Aly)参与RNA的稳定、加工和输出。本研究参照已公开的家蚕Bombyx mori aly序列(GenBank登录号:DQ497195.1),通过RT-PCR克隆了家蚕aly/ref基因(Bmaly/ref)。测序结果显示,该基因的开放读码框为765bp,编码254个氨基酸残基,BmAly/REF与黑腹果蝇Drosophila melanogaster、小鼠Mus musculus的同源体的氨基酸序列一致性分别为49.7%和52.7%。结构预测结果显示,BmAly/REF具有REF家族的与RNA结合的结构域RRM,N和C端分别具有REF-N和REF-C基序。进化分析结果显示,昆虫的ALY/REF聚为一类,BmAly/REF与赤拟谷盗Tribolium castaneum、意大利蜜蜂Apismellifera的Aly/REF较为接近。将Bmaly/ref基因克隆进pGS21a(+)载体进行原核表达,重组蛋白免疫小鼠,获得鼠抗BmAly/REF多抗。免疫荧光实验结果显示,BmAly/REF在细胞质和细胞核中均有分布,但主要分布在细胞核中。芯片数据分析显示Bmaly/ref基因在家蚕幼虫5龄第3天各组织中均有较高水平的表达。研究结果显示BmAly/REF可能在RNA的核输出方面发挥作用,为进一步探讨BmAly/REF的功能奠定了基础。

摘要: 为了阐明蚕丝蛋白基因表达调控的分子机制,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统及实时荧光定量PCR等技术,对家蚕Bombyx mori丝素P25基因启动子上游1233bp的活性及其调控元件的功能进行了分析。结果表明:在P25启动子上游-423-1233区和-127-238区存在正调控元件,在-238-423区段存在负调控元件;PSGF和BMFA两结合元件在P25基因表达中起负调控作用。PSGF结合元件对A3启动子在后部丝腺的活性具有一定的增强作用,进一步验证了PSGF调控元件的功能。通过对P25基因启动子的活性分析,尤其是对PSGF和BMFA调控元件的功能分析,有利于进一步了解P25基因表达调控的精细机制。