摘要: 昆虫变态发育过程中,蜕皮激素通过一系列的激素相关转录因子进行信号的转导和放大,从而完成对生长变态发育的调控,其中蜕皮激素受体(EcR)及转录因子BR-C和E74A可能作为早期因子发挥作用。为了研究这3个早期转录因子在鳞翅目昆虫中的功能,本研究采用体外合成dsRNA的方法,将合成的dsRNA分别注射熟蚕期的家蚕Bombyx mori,进行RNA干扰,并对这3个基因被RNA干扰后的形态变化和相关的转录因子基因BmHR3A,BmHR39,BmβFTZ-F1,BmE74B和BmE75B的表达进行了实时荧光定量PCR检测。形态学观察结果显示,这3个基因被RNAi后出现异常的蛹和蛾、小翅和死蛹等表型。qPCR检测结果表明:RNAi BmEcR后导致了BmE74A,BmE74B,BmHR3A和BmβFTZ-F1表达水平的显著降低(P<0.05),RNAi BmE74A后导致了BmEcR,BmBR-C,BmE74B,BmHR3A和BmβFTZ-F1表达水平的显著降低(P<0.01),而RNAi BmBR-C后则导致所有被检测的蜕皮激素受体及其相关转录因子的mRNA水平都显著降低(P<0.01)。据此推测,BmBR-C可能在蜕皮激素信号的早期发挥作用,并对其他相关转录因子和蜕皮激素受体有调控作用。

摘要: 为了探究家蚕Bombyx mori EST-SSR标记的多态性,对检索获得的家蚕第12连锁群的4465条EST序列进行了分析,整理和拼接后得到581条非冗余EST序列,总长度约为480kb。其中,有122条序列中共检测到154个EST-SSR,占所研究的EST序列的2.73%,平均每3.12kb含有一个EST-SSR。在所检测的EST-SSR中,三核苷酸和四核苷酸重复是主导类型,分别占总数的36.36%和28.57%,大部分表现为Perfect形式;核苷酸重复平均长度约为16.2bp,最长为30bp。进一步进行同源性分析,发现有26条序列可以在NCBI中检索到同源序列,在这些序列中一共含有40个SSR,其中14个(35.0%)位于5'-UTR,11个(27.5%)位于3'-UTR,15个(37.5%)位于CDS区。根据筛选到的微卫星序列设计11对引物,其中8对引物有扩增产物,且条带清晰;应用引物ES1204对8个家蚕品种进行PCR扩增都呈现多态性。结果说明通过家蚕EST数据库发掘SSR标记是一条可行的途径。

摘要: 家蚕Bombyxmori是卵滞育的昆虫,在滞育期间无形态变化,也不存在器官发育和组织分化,然而其生理代谢过程仍在进行。为进一步研究家蚕滞育的机制,本研究测定了家蚕滞育卵、即时浸酸处理的滞育卵及非滞育卵在胚胎发育过程中的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD,EC1.15.1.1)、过氧化氢酶(catalase,CAT,EC1.11.1.6)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK,EC2.7.1.40)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholine esterase,AchE,EC3.1.1.7)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH,EC1.1.1.28)的活性变化。结果表明:处理后1-7d,即时浸酸处理的滞育卵,SOD活性由56517.00U/g提高到81986.94U/g,CAT活性由14.98U/g提高到106.90U/g,PK活性由25.19U/g提高到181.70U/g,AChE活性由17.88U/g提高到287.86U/g,而LDH活性由169.96U/g下降到122.82U/g。而在非滞育卵中,SOD活性由86417.99U/g下降到66024.19U/g,LDH活性由169.07U/g下降到135.02U/g;CAT活性由1.47U/g提高到44.37U/g,PK活性由20.56U/g提高到92.09U/g,AChE活性由21.40U/g提高到99.17U/g。在滞育卵中,SOD和AChE活性较稳定;CAT活性随发育上升,而LDH活性随发育而下降;PK活性在胚胎发育的前4d呈上升趋势,随后基本保持稳定。通过了解家蚕滞育卵、非滞育卵与即时浸酸卵的相关酶活性在胚胎发育过程中存在的变化,有助于进一步揭示家蚕滞育的机理。

摘要: 为了优选快速、灵敏、特异的家蚕微孢子虫Nosema bombycis分子检测方法和DNA抽提方法,本文通过对家蚕微孢子虫TaqMan探针荧光定量PCR检测方法和SYBRGreen荧光定量PCR检测方法的建立以及反应体系优化,并与普通PCR方法进行比较;再采用4种不同DNA抽提方法分别对PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫悬浮液的效果评价。结果显示:不经过DNA抽提,直接将家蚕微孢子虫发芽液进行PCR反应的效果优于其他方法,检测灵敏度由高到低依次为直接法、酚/氯仿抽提法、动物组织DNA试剂盒抽提法和植物组织DNA试剂盒抽提法;TaqMan探针法检测家蚕微孢子虫发芽液的灵敏度和SYBRGreen法相近,达到微孢子102个/mL,两者均优于普通PCR方法。实验表明,直接采用发芽液结合荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫最为简便、快速、灵敏。该研究结果将有助于提高家蚕微粒子病监控技术和检疫能力,对家蚕微粒子病的检疫和防治具有积极意义。

摘要: 转座子是真核生物基因组的重要组成成分。为了研究家蚕Bombyx mori长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)逆转录转座子的分类及进化,本研究采用denovo预测和同源性搜索相结合的方法,在家蚕基因组中共鉴定出了38个LTR逆转录转座子家族,序列长度占整个基因组的0.64%,远小于先前预测的11.8%,其中有6个家族为本研究的新发现。38个家族中,26个家族有表达序列标签(expression sequencetag,EST)证据,表明这些家族具有潜在的活性。对有EST证据的6个家族和没有EST证据的5个家族用RT-PCR进行了组织表达谱实验,结果表明这11个家族在一些组织中有表达,这进一步证实了这些家族具有转录活性,基于此我们推测家蚕中大部分的LTR逆转录转座子家族很可能具有潜在活性。对转座子的插入时间进行估计,结果表明绝大部分元件都是最近1百万年内插入到家蚕基因组中的。我们还比较了黑腹果蝇Drosophila melanogaster、冈比亚按蚊Anopheles gambiae和家蚕B.mori中Ty3/Gypsy超家族分支的差异,结果表明不同枝在不同昆虫中有着不同的扩张。家蚕中LTR逆转录转座子的鉴定和系统分析有助于我们理解逆转录转座子在昆虫进化中的作用。