摘要: 【目的】本试验旨在探讨桑叶中添加三聚氰胺(Melamine,MEL)对家蚕的生长和血清生化指标的影响,进而揭示三聚氰胺在家蚕体内的代谢途径和毒理学特征。【方法】选取大小基本一致、发育整齐的5龄家蚕600头,随机分成4组(每组3个处理重复,每个重复区50头家蚕,雌雄各半)。对照组饲喂新鲜桑叶,试验组添饲3种非致死浓度水平的三聚氰胺(10、15、20 mg/kg),从起蚕起连续饲喂72 h,测定表型和血淋巴生化指标。【结果】添食三聚氰胺导致家蚕体质量日增长率的相对下降,20 mg/kg剂量的三聚氰胺抑制效果达到显著水平(P<0.05)。家蚕血淋巴糖代谢水平升高,血脂含量降低,而黄嘌呤氧化酶和尿酸含量变化趋势不明显。【结论】桑叶中添加三聚氰胺显著影响了家蚕的体质量增长,以及体内糖代谢和脂代谢,对尿酸代谢的影响较小。

摘要: 【目的】C型凝集素(C-type lectin,CTL)广泛存在于植物和动物中,参与免疫防御反应、发育及细胞信号传导。鳞翅目昆虫中的C型凝集素依据长度和特征功能域可以分成S型、IML型和X型,目前对S型凝集素的功能了解非常有限。本研究对家蚕Bombyx mori L.C型凝集素S11进行了克隆、蛋白表达纯化和初步功能分析。【方法】基于先前对家蚕基因组中所有C型凝集素序列的生物信息学分析,通过PCR克隆了CTL-S11基因的全长c DNA;利用相关软件对核酸和蛋白质序列进行了比对和分析;通过大肠杆菌原核系统表达纯化重组蛋白;通过RT-PCR和荧光定量PCR研究了该基因的组织表达分布和诱导表达;通过凝集实验检测了重组蛋白对细菌的凝集作用。【结果】获得了长度为519 bp的CTL-S11全长c DNA序列,编码173个氨基酸,纯化得到分子量约为18 ku,带有组氨酸标签的重组蛋白。RT-PCR表明该基因在中肠、脂肪体、血细胞和表皮都有表达。荧光定量PCR结果表明,细菌喂食或注射家蚕幼虫后,CTL-S11的表达水平在某些时间点有显著上调。凝集实验显示,在钙离子存在的条件下重组蛋白对大肠杆菌和金黄葡萄球菌有明显的凝集作用。【结论】CTL-S11的表达可以被细菌显著诱导,重组蛋白可以引起细菌的凝集,因此其有可能作为免疫受体参与家蚕对病原微生物的识别。

摘要: 【目的】昆虫体内的蜕皮酮和20羟基蜕皮酮(20E)是两种主要的蜕皮甾醇激素,其中蜕皮酮是20E的前体,而20E是有活性的蜕皮甾醇激素。本研究旨在建立一种测定昆虫血淋巴中蜕皮激素高效、稳定、准确的方法。【方法】采集家蚕血淋巴,抽提总蜕皮甾醇激素,利用反相高效液相色谱法(反相HPLC)分离并收集蜕皮酮与20E,进而利用酶联免疫吸附法(ELISA)测定家蚕血淋巴的总蜕皮甾醇激素、蜕皮酮和20E各自的滴度。【结果】计算出总蜕皮甾醇激素中蜕皮酮与20E的比例,推算出蜕皮酮合成和分泌、以及蜕皮酮转化为20E的能力。【结论】该方法高效、稳定、准确,可广泛应用于昆虫蜕皮甾醇激素滴度的测定。

摘要: 【目的】为探讨昆虫嗅觉感受机理及其化学感受行为机制提供技术基础。【方法】对家蚕Bombyx mori雄蛾触角部分切除后,测定其触角电位(EAG)变化;构建家蚕雄蛾并联等效电路模型;分析EAG与电路模拟器件间的关系。【结果】切除部分分枝后,EAG幅值与整根触角相比,除保留中部10个分枝的处理组无显著差别外,其余6组均显著减小;噪声强度有随触角分枝数量减少而增加的趋势;信噪比(SNR)有随分枝数量减少而减小的趋势;触角中部分枝数量由10个逐渐减少时,其EAG幅值随之线性减小。切除尖部主干后,EAG幅值增加,噪声强度减小,SNR增强;切除基部主干后,EAG幅值减小,噪声强度增加,SNR减弱。构建获得了基于触角主干和分枝阻抗的EAG并联等效电路模型,能较好地模拟实验测定结果。【结论】触角主干和分枝的阻抗对EAG信号输出有较大影响,EAG并联等效模型经具体化和改进后可适用于其他类型昆虫触角的EAG实验分析。

摘要: 【目的】原核表达家蚕Bombyx mori丝氨酸蛋白酶抑制剂20(Serine proteinase inhibitor 20,Bm Serpin-20),分析Bm Serpin-20基因和蛋白组织表达分布特点,以及不同外源病原物刺激家蚕后Bm Serpin-20基因的表达模式。【方法】利用p ET-28a表达载体在大肠杆菌Transetta(DE3)中融合表达Bm Serpin-20蛋白,利用纯化的重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用实时定量PCR技术及Western blot方法分别分析Bm Serpin-20基因和蛋白的组织表达水平,以及病原物免疫刺激后的表达模式。【结果】在大肠杆菌中正确表达和纯化了融合Bm Serpin-20蛋白,并制备了多克隆抗体;Bm Serpin-20基因和蛋白在脂肪体、中肠、血细胞、马氏管、表皮、睾丸、卵巢中均有表达,且在表皮中表达量最高;家蚕5龄幼虫经核型多角体病毒(Nuclear polyhedrosis viruses)、藤黄微球菌Micrococcus luteus、大肠杆菌Escherichia coli、白僵菌Beauveria bassiana处理后,Bm Serpin-20基因表达量先下调而后上调,但不同病原物在不同时间的影响不尽相同。【结论】研究了Bm Serpin-20基因和蛋白的表达模式,为下一步研究其在家蚕免疫系统中的作用奠定了基础。