摘要: 为查明广东和广西地区家蚕Bombyx mori病原白僵菌的来源及其菌株间的相互关系,本研究利用了微卫星标记(simple sequence repeats,SSRs)技术,分别对采自广东、广西蚕区的白僵菌菌株居群之间和居群之内的遗传多态性进行了研究。结果发现,两广白僵菌居群之间的基因分化系数(Gst)是0.0590,多态位点百分率(PPL)为97.73%,Nei氏基因多样性指数(H)为0.1896,Shannon氏信息多样性指数(I)为0.3165,表明两广家蚕来源的白僵菌居群间的遗传分化较小;两个居群内部的遗传多态性研究结果分别是广东白僵菌居群的PPL=68.18%,H=0.1910,I=0.3044,而广西白僵菌居群的PPL=65.91%,H=0.1713,I=0.1791,表明广东白僵菌居群的遗传多样性水平较高,广西白僵菌居群遗传多样性水平相对较低。最后,利用Nei氏遗传距离进行了两广地区白僵菌菌株间地理来源关系的聚类分析,结果表明实验室保存菌株单独聚为类群Ⅰ,而不同采集地的菌株聚为类群Ⅱ。结果反映了生产来源的白僵菌菌株存在遗传多态性和基因分化现象,暗示了家蚕白僵病病原来源的复杂性,还说明应用SSRs技术进行家蚕白僵病病原的溯源是一条可行的途径。

摘要: 昆虫免疫稳态的维持有赖于准确地激活和有效地抑制Toll或IMD信号通路中的关键转录因子——Dorsal/Dif或Relish。在果蝇等昆虫中,已报道了多种降低转录因子稳定性和活性的免疫稳态调控分子,突变或敲除这类分子导致免疫系统的过度激活。对家蚕Bombyx mori免疫信号通路的研究中,至今为止尚无对这类分子的探索。本研究通过比较基因组学,在家蚕基因组中鉴定了多个可能参与免疫稳态调控的分子,包括Wnt家族成员、Ubc9、FAF和POSH等;并通过检测家蚕被微生物感染后这些分子在多种免疫器官中的诱导表达模式,发现这些分子的表达水平在微生物感染后普遍呈下降趋势,虽然在某些组织中表达量有明显的升高(>1.5倍),但此高表达水平均不能维持且迅速下降;而且免疫稳态调控分子和受其调控的信号通路的对应关系在不同组织中表现出差异。本研究是首次对家蚕免疫稳态调控分子的报道,为深入研究家蚕免疫负调控的分子机制提供了参考。

摘要: 为了调查5℃低温处理是否改变家蚕Bombyxmori卵滞育NAD代谢,本研究利用HPLC和分光光度法测定了经25℃和5℃分别处理的滞育卵中NADH含量、NAD+含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性和胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)活性。结果表明:5℃处理的NAD(NADH+NAD+)含量和cMDH活性分别增加了106%和53%,并且显著高于25℃处理(P<0.01);但是两种处理的NADH/NAD+比值和LDH活性没有显著差异(P>0.05)。据此推测,5℃低温处理加强了家蚕滞育卵NAD+合成和再生能力。

摘要: 【目的】获得家蚕Bombyx mori和野桑蚕Bombyx mandarina脂肪酸脱氢酶基因desat4的cDNA及其启动子序列,并应用原核表达系统获得目的蛋白质,为进一步研究该基因的功能提供基础。【方法】利用RACE技术克隆家蚕和野桑蚕desat4基因全长cDNA序列,基于家蚕全基因组序列设计引物克隆它们的启动子,并采用原核表达技术对该基因进行异源表达。【结果】克隆得到家蚕与野桑蚕desat4基因全长cDNA,长度分别为1717 bp和1718 bp,ORF长度为1059 bp,编码352个氨基酸残基,结构上有3个组氨酸保守区和4次跨膜结构域,说明该蛋白质是膜蛋白。同源性分析发现Desat4氨基酸序列与烟草天蛾Manduca sexta MsexKPSE脱氢酶拥有88.9%相似性。克隆获得的家蚕和野桑蚕desat4基因启动子序列长度分别为1808 bp和870 bp,该区域包含有热休克因子HSF(heat shock factor)结合位点、NIT2结合位点和CdxA(caudal type homeobox transcription factor A)结合位点等等,并未发现有典型的TATA-box,但在靠近5'-UTR区域发现了转录起始因子特征序列。时期表达谱分析显示desat4基因从刚产下卵到成虫(蛾)的36个不同发育时间点都有持续稳定的表达。应用原核表达系统成功地表达了Desat4蛋白质,并用温和变性剂十二烷基-β-D-麦芽吡喃糖苷(dodecy l-β-D-maltoside,DDM)就能很好地促进该蛋白质的溶解。【结论】本研究成功地克隆了家蚕和野桑蚕desat4基因全长cDNA及其启动子序列并进行了序列比对分析,构建了desat4基因的原核表达载体并成功表达,为进一步研究该基因的功能提供参考。

摘要: 气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫与外界环境化学信息交流过程中起着重要作用,对昆虫的觅食、求偶、繁殖具有重要意义。触角结合蛋白(antennal-binding protein,ABP)是OBP家族中的重要成员之一。为进一步探明家蚕Bombyx mori ABP与ABPX基因的结构、表达及功能,本研究利用染色体定位、基因分析及半定量表达分析方法对其进行了研究。染色体定位分析表明,BmABP和BmABPX分别位于家蚕第5和第26染色体上,基因结构差异较大,可能功能上有较大差异。对家蚕胚胎、幼虫和成虫不同发育阶段的雌、雄虫多种组织进行基因表达谱分析发现,BmABP在家蚕发育的各个虫态、多种组织器官中都有较高表达,无时间特异性和组织特异性;BmABPX在不同发育时期和不同组织间差异显著(P<0.05),相对表达量以触角中最高,其他非嗅觉组织中也多有表达,性别间差异不大。结果提示,BmABP和BmABPX除了具有嗅觉相关功能外,很可能还具有其他未知的生理功能。