摘要: 【目的】本研究旨在通过寻找家蚕胚胎发育因子(embryonic development factor, EDF)基因BmEDF G-四链体(G-quadruplex, G4)结构的结合蛋白，进一步探究G4结构调控家蚕胚胎发育的可能作用和机制。【方法】通过圆二色谱(circular dichroism, CD)和凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)验证G4序列在体外是否形成G4结构；通过启动子活性实验验证启动子区G4结构对的表达调控的影响；通过qRT-PCR检测在家蚕胚胎发育各时期的表达量变化。通过EMSA联合质谱分析可能与BmEDF的G4结构结合的蛋白，然后将与G4结构结合的2个候选蛋白和分别进行基因克隆、表达和纯化，再通过EMSA实验分别验证候选蛋白和与的G4结构结合与否。【结果】CD和EMSA实验都证明的G4序列在体外可以形成G4结构。启动子活性实验表明G4结构的存在对BmEDF转录表达具有正调控的作用。qRT-PCR结果表明在产卵后120 h时表达量显著升高。经原核表达纯化，获得BmeIF4H和BmADDH重组蛋白。EMSA实验表明重组蛋白BmeIF4H在体外与BmEDF的G4结构结合，BmADDH不与BmEDF G4结构结合。【结论】家蚕胚胎中的BmeIF4H蛋白可能与BmEDF的G4结构结合。本研究为解析家蚕胚胎发育的DNA高级结构调控机理提供了实验证据。

摘要: 【目的】克隆家蚕Wnt信号通路下游关键基因 isoforms A/H/I/S转录剪接体3 (3)，分析其序列和表达特征。【方法】从NCBI数据库检索家蚕3，根据其编码序列(coding sequence, CDS)设计引物，利用PCR从家蚕幼虫中肠和血淋巴中进行克隆并测序验证。利用SilkDB 3.0, SMART, 多序列比对和系统发育树分析Pangolin X3的序列特征。利用qRT-PCR分析3在家蚕5龄第3 天幼虫不同组织(头、血淋巴、体壁、性腺、中肠、前部丝腺、中部丝腺、后部丝腺、脂肪体和马氏管)中的相对表达水平。【结果】从家蚕幼虫中肠和血淋巴克隆3(GenBank登录号: XM_038020921)的CDS，其开放阅读框长1 560 bp，编码519个氨基酸残基，预测分子量为55.86 kD，预测等电点为7.53。Pangolin X3蛋白含有保守的βcatenin结合位点和HMG结构域，其氨基酸序列在不同的昆虫中比较保守，特别是与DNA结合的HMG结构域，而与β-catenin结合的N末端CTNNB1结构域部分氨基酸残基发生变异。组织表达谱显示，3在家蚕5龄第3 天幼虫中肠、血淋巴和性腺中的相对表达水平较高，在头、体壁、前部丝腺、中部丝腺、后部丝腺、脂肪体和马氏管中的相对表达水平较低。【结论】本研究克隆了家蚕3，分析了其序列和表达特征，为深入研究家蚕Pangolin的生物学功能提供了基础。

摘要: 【目的】 本研究旨在以家蚕为研究模型探索pax3基因在鳞翅目昆虫中的生物学功能。【方法】利用PCR扩增验证家蚕Bmpax3外显子序列；利用qRT-PCR检测Bmpax3在5龄第3天家蚕幼虫头、表皮、脂肪体、中肠、马氏管、前部丝腺、中部丝腺、后部丝腺和生殖腺(包括精巢和卵巢)中的表达谱；利用双元转基因CRISPR/Cas9系统构建3敲除突变体，分析突变对家蚕幼虫存活、体节分化及性别差异的影响。【结果】3在家蚕5龄第3天幼虫头、中肠和丝腺中均有表达，其中在前部丝腺表达量最高。3突变体的卵孵化率约为90%，但约有80%的突变体在1龄幼虫期死亡，有将近10%的突变个体能幸存并发育到成虫阶段，并且存活成虫数存在性别差异，雄性显著多于雌性。在幸存的成虫中，约有将近1/2的个体腹部末端体节分节异常，表皮条纹混乱，腹节腹板部分缺失，生殖器官及其周围的其他辅助器官出现发育缺陷。【结论】Bmpax3发生突变后会对家蚕的生存及形态发育产生较大的影响，提示Bmpax3可能参与了家蚕的生长发育过程。

摘要: 用大肠杆菌感染中国家蚕(Bombyx mori)蛹,从中提取总RNA,用RT-PCR方法获得蚕抗菌肽基因CBM1 cDNA部分片段并克隆测序,以此蚕抗菌肽基因CBM1的部分片段,设计特异性引物,用3′、5′RACE的方法,获得蚕抗菌肽基因CBM1 cDNA的全长序列;用PCR的方法,从中国家蚕蛹基因组DNA获得抗菌肽CBM1基因的700 bp、1 100 bp左右的2个片段,初步证实中国家蚕抗菌肽基因在单倍体染色体中至少存在2个拷贝。

摘要: 【目的】Fox家族蛋白是调控动物发育的关键转录因子。本文分析了鳞翅目昆虫家蚕Bombyx mori的BmFoxG亚家族蛋白在精巢发育中的作用,为基于生殖系统的家蚕性状优化或害虫不育技术的开发提供理论依据。【方法】利用PCR克隆家蚕BmFoxG-1和BmFoxG-2基因;通过生物信息学工具对BmFoxG蛋白的结构及理化性质进行分析;采用qPCR技术检测BmFoxG基因在家蚕不同发育阶段的精巢中的表达变化;在家蚕Bm12细胞株中过表达BmFoxG-1,并通过qRT-PCR分析BmFoxG-1调控的靶基因。【结果】本文克隆获得了BmFoxG-1(933bp)和BmFoxG-2(702bp)两个基因。BmFoxG-1和BmFoxG-2蛋白均包含保守的Forkhead结构域,但BmFoxG-1蛋白在C端多出约60个氨基酸。BmFoxG-2基因在家蚕不同发育时期的精巢中的表达量均较低;BmFoxG-1的表达均显着高于BmFoxG-2,且随着发育时期而变化,暗示BmFoxG-1参与精巢的发育。生殖细胞发育基因BmVasa、BmCyclinA等多个细胞周期基因以及精子鞭毛发育相关基因BMSK0009828在不同发育阶段的精巢中的表达趋势与BmFoxG-1类似,且BmFoxG-1在家蚕细胞中的过表达可以显著上调BmVasa、BmCyclinA和BMSK0009828等精巢发育相关基因的表达。【结论】我们推测BmFoxG-1蛋白可能通过调节精巢细胞周期或生殖细胞的功能来调节家蚕精巢的发育。