摘要: 采用口服肾上腺皮质激素的方法在国产昆明小鼠成功诱导卡氏肺孢子虫感染。在 54只实验鼠中 ,4 7只发现虫体 ,阳性率为 87 0 3%。表明该方法可适用于建立卡氏肺孢子虫感染的小鼠动物模型 ,并具有简便、经济等优点。

摘要: 采用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ,对正常和感染粘孢子虫的鲫鱼动脉球、肝脏、鳃、脑、肠、肌肉、眼、鳍 8种组织可溶性蛋白质进行分析比较。结果表明 :病鱼的动脉球、肝脏、鳃、脑、肠 5种组织的蛋白质电泳谱带与正常鱼相比有较大变化 ,动脉球缺失 1条谱带同时又诱导出 1条新谱带 ;肝脏有 9条谱带缺失 ;鳃有 2条谱带缺失的同时诱导出 3条新谱带 ;脑中新增 3条谱带 ;肠中有 5条谱带缺失同时产生 3条新谱带。这些变化可作为辅助疾病诊断的生化指标 ,为从生化水平上揭示该病的致病机理及开展有效的早期防治研究奠定基础。

摘要: 【目的】本研究对东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae的γ-微管蛋白（γ-tubulin）基因γ-tubulin进行表达验证，明确γ-tubulin的分子特性，并对东方蜜蜂微孢子虫和其他物种的γ-tubulin蛋白进行保守基序和系统进化分析，以期丰富东方蜜蜂微孢子虫的γ-tubulin信息，并为深入开展γ-tubulin的功能研究提供基础。【方法】通过PCR验证γ-tubulin的表达。通过Expasy网站上的相关软件预测和分析γ-tubulin的理化性质、信号肽、磷酸化位点、二级结构和三级结构。使用MEME软件预测东方蜜蜂微孢子虫和其他物种γ-tubulin的保守基序。通过Mega 11.0软件对东方蜜蜂微孢子虫和其他物种的γ-tubulin进行氨基酸序列多重比对，并采用邻接法构建基于γ-tubulin的系统进化树。【结果】γ-tubulin在东方蜜蜂微孢子虫孢子中真实表达。γ-tubulin编码433个氨基酸，分子量约为49.11 kD，分子式为C_(2186)H_(3422)N_(582)O_(663)S_(20)，脂溶系数为86.65，等电点为5.75;γ-tubulin包含29个丝氨酸酸化位点，5个酪氨酸酸化位点及14个苏氨酸磷酸化位点，包含191个α-螺旋，66条延长链，17个β-转角及159个无规则卷曲。另外，γ-tubulin同时定位于细胞核、细胞质和线粒体。东方蜜蜂微孢子虫与蜜蜂微孢子虫Nosema apis等9个物种的γ-tubulin均含有5个相同的保守基序。系统进化分析结果显示，东方蜜蜂微孢子虫与蜜蜂微孢子虫、家蚕微孢子虫Nosema bombycis、兔脑炎微孢子虫Encephalitozoon cuniculi、海伦脑炎微孢子虫Encephalitozoon hellem、角膜条孢虫Vittaforma corneae的γ-tubulin蛋白聚为一个大支，而小孢根霉Rhizopus microsporus与奇孢根霉Rhizopus azygosporus的γ-tubulin聚为另一个大支；东方蜜蜂微孢子虫及其姐妹种蜜蜂微孢子虫的γ-tubulin进化距离最近。【结论】证实了东方蜜蜂微孢子虫孢子中γ-tubulin的真实表达，明确了γ-tubulin的分子特性，并揭示东方蜜蜂微孢子虫与蜜蜂微孢子虫的γ-tubulin蛋白亲缘关系最近，γ-tubulin蛋白在东方蜜蜂微孢子虫、蜜蜂微孢子虫、兔脑炎微孢子虫、海伦脑炎微孢子虫及角膜条孢虫中具有较高的保守性。

摘要: 【目的】东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae侵染蜜蜂导致微孢子虫病，但侵染机制未明。本研究拟在前期工作基础上，验证nce-miR-15325的相对表达量及序列信息，并进一步检测nce-miR-15325及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂Apismelliferaligustica工蜂过程的相对表达量，为进一步探究nce-miR-15325调控侵染的功能和机制提供依据。【方法】利用Stem-loopRT-PCR和Sanger测序对nce-miR-15325进行相对表达量及序列信息验证。利用相关生物信息学软件对nce-miR-15325的靶基因进行信息预测及分析。通过RT-qPCR检测nce-miR-15325及其靶基因的相对表达量。【结果】鉴定到在东方蜜蜂微孢子虫孢子中nce-miR-15325真实存在并表达。预测到nce-miR-15325的11个靶基因，其中分别有3、4、7和4个靶基因可注释到KEGG、GO、Nr和Swissprot数据库。与接种后1 d相比，nce-miR-15325在2 dpi(day post inoculation, dpi)的表达量变化不显著，而在4、6和8 dpi时，相对表达量均显著下调（P<0.05），总体表达趋势呈下调。相较于1 dpi，靶基因NCSS在2、4、6和8 dpi的表达量均显著下调（P<0.05）；类似的，靶基因DTⅢ在2、4、6和8dpi的表达量均显著下调（P<0.05），总体上表现出下降的表达趋势。【结论】证实了东方蜜蜂微孢子虫孢子中nce-miR-15325存在和表达的真实性，明确了在东方蜜蜂微孢子虫侵染过程的nce-miR-15325及其靶基因的动态表达模式，揭示nce-miR-15325通过正调控NCSS和DTⅢ表达潜在调节侵染过程。

摘要: 【目的】中华蜜蜂囊状幼虫病毒（Chinese sacbrood virus,CSBV）和东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae都是严重威胁蜜蜂健康的重要病原，本研究旨在探究2种病原顺序感染对中华蜜蜂Apiscerana cerana存活率、营养代谢和免疫的影响。【方法】设置中华蜜蜂取食正常食物、先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫和先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV3个处理，利用PCR检测中华蜜蜂在取食第2天和第4天后体内病原增殖情况；通过RT-qPCR检测中华蜜蜂感染病原后第2天和第4天后体内CSBV数量以及营养代谢基因（ilp1、ilp2、hexamerin70b和hexamerin70c）和免疫应答基因（toll、relish、jra、apidaecin、abaecin、defensin、hymenoptaecin和JAK）的表达情况。【结果】先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组的中华蜜蜂体内孢子量高于先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组，而先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组的中华蜜蜂体内CSBV拷贝数显著高于先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组。先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组的中华蜜蜂营养代谢基因ilp1、ilp2、hexamerin70c和hexamerin70b的表达水平随感染时间延长逐渐呈现下调，而先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组中显著上调。先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组中华蜜峰免疫基因toll和relish表达量呈现先增加后下降，而jra、JAK、apidaecin、abaecin、defensin和hymenoptaecin的表达量显著增加，而先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组中8个免疫基因的表达量均显著增加。【结论】在顺序感染过程中，东方蜜蜂微孢子虫的感染抑制CSBV的增殖，而CSBV的感染则有助于东方蜜蜂微孢子虫的增殖。先喂食CSBV比先喂食东方蜜蜂微孢子虫对中华蜜蜂营养和生长发育的影响更显著，且更易引起宿主的免疫防御，表明CSBV与东方蜜蜂微孢子虫顺序感染中蜂后引起的免疫应答及营养代谢更为复杂。