摘要: 目的 本研究旨在阐明微小隐孢子虫亲环蛋白CpCyP1（Cryptosporidium parvum cyclophilin protein-1）的亚细胞定位和酶动力学等特征，为进一步深入研究其生物学功能和探索抗虫药物靶点提供基础。方法 采用荧光定量qRT-PCR,对CpCyP1基因在隐孢子虫不同发育时期转录水平进行分析；通过原核表达系统获得带有His标签的CpCyP1重组蛋白（His-CpCyP1）,并用该蛋白免疫新西兰家兔以制备特异性抗血清，利用亲和层析技术纯化所得抗血清；通过Western blot检测子孢子中的CpCyP1蛋白表达，通过间接免疫荧光（IFA）技术确定CpCyP1在虫体内不同发育阶段的亚细胞定位；最后，通过吸光度比色法测定His-CpCyP1的肽基脯氨酰顺反异构酶（peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, PPIase）活性，并评估环孢菌素A（cyclosporine A, CsA）对His-CpCyP1酶活性的影响。结果 CpCyP1基因在隐孢子虫的各个发育阶段均有转录，尤其在裂殖体和配子阶段表达量较高；CpCyP1蛋白在子孢子和细胞内阶段均定位于虫体胞浆内。酶动力学研究显示，CpCyP1对含脯氨酸的短肽底物的米氏常数K_m为456.4μmol/L,最大反应速率V_max为1.981 U[μmol/（min·μg）]。CsA与CpCyP1结合的解离常数K_d为5.122μmol/L,半数抑制浓度IC₅₀为1.004μmol/L。结论 CpCyP1在隐孢子虫的各个发育阶段均有表达，并且重组的CpCyP1具有微摩尔级别的PPIase酶活性，该活性可以被CsA所抑制，这提示CpCyP1可能是CsA的潜在底物，因此，CpCyP1作为抗虫药物靶点的潜力值得进一步研究。

摘要: 【目的】本研究旨在为深入开展西方蜜蜂Apis mellifera caspase-3基因（Am-caspase-3）的功能研究提供参考和依据。【方法】通过PCR扩增Am-caspase-3的编码序列（Coding sequences,CDS）后进行Sanger测序验证，并利用生物信息学工具预测Am-caspase-3蛋白的理化性质、分子特征及蛋白互作网络。利用MEGA软件进行西方蜜蜂和其他物种caspase-3系统进化分析。采用RT-qPCR检测Am-caspase-3在不同组织和发育阶段，工蜂成虫应答东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae侵染过程以及工蜂幼虫应答蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis侵染过程中的相对表达量。【结果】Am-caspase-3的CDS长度为1 023 bp，编码340个氨基酸。Am-caspase-3的分子式为C₁₇₆₀H₂₇₀₃N₄₅₉O₅₃₉S₂₃，相对分子量为39 kD，不含跨膜结构域和信号肽区，但包含44个磷酸化位点，主要分布于细胞质。Am-caspase-3的二级结构包括184条无规则卷曲，90个α-螺旋，46条延伸链和20个β-转角。在Am-caspase-3中鉴定到1个结构域和3个保守基序；Am-caspase-3与其模版1m72.1.A之间的同源性达73.00%。Am-caspase-3与CytC等12个蛋白构成1个互作网络。西方蜜蜂与东方蜜蜂Apis cerana的caspase-3之间同源性达81.23%，在进化树上聚为一支。Am-caspase-3在西方蜜蜂工蜂不同组织中差异表达，在中肠中的表达量最高且极显著高于其他6个组织（P<0.01）。Am-caspase-3在3日龄幼虫中的表达量达峰值且极显著高于卵、7-8日龄预蛹及12日龄蛹（P<0.01）。Am-caspase-3在2、6、15和18日龄成虫体内的表达量显著高于1日龄成虫体内的表达量（P<0.05）。Am-caspase-3在工蜂成虫应答东方蜜蜂微孢子虫侵染的1、4、7、10和13 d皆显著下调（P<0.05）,Am-caspase-3在工蜂幼虫应答蜜蜂球囊菌侵染的1、2和3 d均显著上调（P<0.05）。【结论】成功克隆到Am-caspase-3的CDS;Am-caspase-3是潜在的酸性蛋白、亲水性蛋白和胞内蛋白，与CytC等11个蛋白之间存在互作关系；西方蜜蜂与东方蜜蜂的caspase-3之间同源性最高；Am-caspase-3潜在参与西方蜜蜂工蜂不同组织和虫态的发育过程及宿主应答病原真菌侵染的过程。

摘要: 为完善努发楚克拉虫的形态学与分子分类学数据,系统解析该物种内分化格局并揭示其系统发育关系,研究结合新获得的寄生于鲫的3个努发楚克拉虫株系之形态数据和对应的3条18S rDNA序列,比较了寄生于鲫、银鲫、草鱼和白梭吻鲈的株系间形态、分子特征及系统发育关系。结果显示:新获的努发楚克拉虫的成熟黏孢子两极端钝尖,壳瓣观呈椭圆形或卵形,缝面观呈卵圆形;两梨形极囊位于黏孢子两极端、大小相等,位于缝线平面两侧呈中心对称。新获得的努发楚克拉虫3株系与模式株系形态一致。对应的3条新序列(MT014013、PV077966和PV077967)与GenBank中同样寄生于鲫的努发楚克拉虫序列(MH766650)相似度最高,为99.92%—100%;与寄生于银鲫的努发楚克拉虫序列(DQ377690)有99.61%—99.68%相似度;与寄生于草鱼(DQ377688)和白梭吻鲈(GU471266)的努发楚克拉虫序列相似度较低,分别为97.55%—97.71%和97.79%—97.93%,且遗传距离值分别对应为0.020(vs. DQ377688)和0.019(vs. GU471266),相应的差异碱基数分别为42和14。系统发育分析显示,寄生于鲫、银鲫的努发楚克拉虫支系形成明显的姐妹关系,寄生于草鱼、白梭吻鲈的努发楚克拉虫为独立进化支系,寄生于白梭吻鲈的努发楚克拉虫远离寄生于鲫、银鲫乃至草鱼的努发楚克拉虫支系。研究结果揭示了具有多宿主性的努发楚克拉虫已出现分化,存在隐存种可能,这为后续该物种的种群遗传学研究提供了重要资料;寄生于草鱼、白梭吻鲈的株系可能为不同物种;重庆是该种的新地理分布。研究进一步完善了努发楚克拉虫的形态学、分子数据以及地理分布数据库。

摘要: 在湘江湖南株洲段开展鱼类黏孢子虫多样性调查过程中,发现一种寄生于鳜胆囊的黏孢子虫,鱼体未出现典型的致病症状。形态学特征、宿主和寄生部位及分子数据表明该黏孢子虫为两极虫新种,命名为鳜两极虫(Myxidium chuatsis n. sp.)。成熟孢子壳面观为纺锤形,孢子两端稍突起,壳面具有6—8条壳纹;缝面观卵形,缝脊弯曲;孢子长(10.7±0.4)μm(10.0—11.4μm),宽(5.7±0.3)μm(5.4—6.1μm),厚(5.8±0.3)μm(5.4—6.1μm)。两个极囊梨形,位于孢子的两端,大小相等;极囊长(3.2±0.2)μm(2.9—3.7μm),宽(2.8±0.1)μm(2.6—3.2μm),囊间间距为(3.7±0.7)μm(2.8—5.2μm),极丝4—5圈。形态比较发现,鳜两极虫与已报道的两极虫可明显区分。基于SSU rDNA序列的BLAST比对发现,鳜两极虫与寄生于霍氏野鲮胆囊的两极虫未定种序列相似性最高(94.74%),但远低于种内序列相似性。系统发育分析表明两极虫为多系起源,寄生部位可能在两极虫属系统演化过程中发挥了重要作用,壳纹的有无与两极虫物种分化密切相关。

摘要: 报道了国内圈养羊驼(Vicugna pacos)住肉孢子虫病的确诊病例。诊断的依据是:(1)提示性临床症状,动物机体出现消瘦、贫血症状,临床出现肌肉震颤和神经症状。(2)尸体剖检特征性病变,心冠脂肪萎缩,呈胶冻样变;心包、胸腔有较多积液;食管平滑肌内有多个纺锤形的虫体包囊,呈乳白色,与肌纤维平行。(3)组织病理学特征,镜下食道平滑肌内可见住肉孢子虫包囊、小室及慢殖子;肌纤维出现不同程度的透明变性、萎缩、溶解,间质结缔组织增生。住肉孢子虫属专性异宿主性寄生虫,尚无特效药物,定期查虫驱虫、提高机体抵抗力和严控环境猫狗的流窜是预防本病的关键。