摘要: 以新孢子虫Nc-5基因为目的基因,建立检测新孢子虫的PCR方法并初步应用。根据Gen Bank发布的新孢子虫Nc-5特异性基因序列设计引物,以新孢子虫基因组DNA为模板,利用梯度PCR法优化反应条件,建立PCR检测方法。以弓形虫、疟原虫、牛环形泰勒虫、包拉米虫和马尔太虫为模板进行扩增以验证建立方法的特异性。采用紫外分光光度计测定新孢子虫基因组DNA浓度和纯度,倍比稀释后的DNA进行PCR扩增,产物电泳分析确定建立方法的敏感性;选择高浓度和低浓度的新孢子虫基因组DNA重复检测3次,分析建立方法的重复性和稳定性。利用该方法对实验室建立的小鼠感染模型进行初步应用,评价建立方法的检测效果。结果成功建立新孢子虫的核酸扩增检测方法,扩增序列与Gen Bank(LN714476.1)中Nc-5基因序列一致性为100%,建立的新孢子虫核酸扩增检测方法与弓形虫、疟原虫、牛环形泰勒虫、包拉米虫和马尔太虫均无交叉反应,最低能检测新孢子虫DNA浓度为0.5788 pg/μL,应用该方法检测感染新孢子虫的BALB/c小鼠模型,可在肺和脑组织中检测到新孢子虫的感染。结果表明,建立的新孢子虫核酸扩增检测方法有效,并为后续研究奠定基础。

摘要: 采用PCR技术从已构建的微小隐孢子虫cDNA文库中扩增含Apple结构域基因,构建pGEX-4T-1-Apple重组质粒,并进行原核表达及纯化,得到分子质量大小约为34 kDa的GST-Apple重组蛋白,以其为免疫原,免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,测定其免疫球蛋白亚类及效价,并用蛋白质印迹法(Western-blot)鉴定其特异性。结果共筛选出能稳定分泌抗重组Apple单克隆抗体的2株杂交瘤细胞株,抗体亚类均为IgG1,Western-blot分析显示2株单抗均能与重组蛋白GST-Apple发生特异性结合。为研究Apple结构域在隐孢子虫侵入过程中的功能提供有效工具。

摘要: 肺孢子虫属(Pneumocystis)含多种具宿主种特异性的肺孢子虫,它们可以诱导严重免疫功能低下宿主产生肺孢子虫肺炎。断乳兔可自发发生肺孢子虫肺炎,引起典型的肺部病理组织学改变。本文就兔源肺孢子虫光镜与电镜结构、基因和种系发育学特点进行综述,并与其他种肺孢子虫进行比较,从生物学与种系发育学上证据表明兔源肺孢子虫应是一新种肺孢子虫,同时也证实了肺孢子虫具有遗传多样性。

摘要: 采用透射电镜观察了贝氏隐孢子虫在珍珠鸡气管和法氏囊的发育。贝氏隐孢子虫各期虫体均在上皮细胞微绒毛所形成的带虫空泡内发育，虫体基部有一营养器。滋养体呈圆形，有一个细胞核。胞质中有发达的粗面内质网。裂殖体经２或３次核分裂，以出芽方式形成４或８个裂殖子。成熟的裂殖子呈香蕉形，大小为２．８５×０．７０μｍ，被双层膜。小配子体由滋养体发育而来，内含多个缺少核仁的细胞核，细胞核移向胞质浅层，并进入胞质突起成为小配子的细胞核。大配子内可观察到二种成囊体和大量多糖颗粒，并在其胞质的空泡内发现小配子类似物。孢子生殖也在带虫空泡内进行，最终形成一个大残体和４个子孢子。子孢子有一个细胞核，富含微线和多糖颗粒。

摘要: 目的 探究微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白的亚细胞定位。方法 本研究以微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白1(Cryptosporidium parvum Amino acid transporter 1, CpAAT1)为研究对象，设计合成了特异性多肽片段，免疫家兔制备多克隆抗体。利用Western blot验证该抗体的特异性，通过间接免疫荧光的方法对该蛋白的亚细胞定位进行了分析。结果 CpAAT1多克隆抗体能特异性识别虫体天然蛋白，后者在微小隐孢子虫生活史的各个时期均有表达。子孢子时期，CpAAT1定位于虫体表膜；无性生殖期时该蛋白定位在成熟的裂殖子表膜；在有性生殖阶段，雌雄配子体均可被该抗体标记。结论 本研究为进一步探索微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白的转运机制提供了一些新线索。