摘要: 采用同源克隆和RACE技术,从孟氏隐唇瓢虫Cryptolaemus montrouzieri Mulsant中克隆到细胞色素P450CYP9Z401基因的c DNA全序列(Gen Bank number:KP164813)。c DNA全长1722 bp,包含3'非编码区域(UTR)为86 bp和5'UTR为49 bp,开放阅读框(ORF)长1587 bp,编码528个氨基酸。预测的分子量为61.27 k D,理论等电点为6.58,无信号肽结构,在2-20氨基酸处存在跨膜螺旋。该基因拥有细胞色素P450特征序列螺旋C、螺旋K和Meander区域,另外还有血红素结合区(1个氨基酸差异)和螺旋I区(2个氨基酸差异)。与其他昆虫的CYP9家族基因比较,与赤拟谷盗Tribolium castaneum同源性最高,为47%,系统发育分析也表明两者的亲缘关系最近。CYP9Z401基因的克隆和比较分析为进一步深入研究孟氏隐唇瓢虫的细胞色素P450基因功能及其进化具有重要意义。

摘要: 采用RT-PCR和RACE技术,从孟氏隐唇瓢虫Cryptolaemus montrouzieri Mulsant中成功克隆出气味结合蛋白(Com OBP1)基因的全序列(Genbank登陆号:KU170686)。Com OBP1基因全长922 bp,包括5'端长为40 bp的非编码区域(UTR),及3'端长为462 bp的UTR,开放阅读框ORF长为420 bp,编码139个氨基酸,预测的分子量为15.516 k Da,等电点p I为6.57,存在AATAAA加尾信号。N-末端疏水区包含由20个氨基酸构成的信号肽,无跨膜结构,有4个保守的半胱氨酸,属于Minus-C OBP,也是在孟氏隐唇瓢虫中发现的第一个Minus-C OBP。氨基酸序列中有且仅有一个N-糖基化位点为62 NLSA,并存在2个潜在的磷酸化位点。与其它昆虫的Minus-C OBPs进行同源性比较并构建系统发育树,发现与同为鞘翅目Coleoptera昆虫的同源性较高。利用Real-time PCR、RT-PCR技术对Cmon OBP1基因在孟氏隐唇瓢虫不同发育阶段,不同组织,不同营养条件及不同食性下的表达水平进行了测定,结果显示,Cmon OBP1基因在整个发育阶段均有表达,雄性成虫期具有最高表达量,且多在成虫的头部及翅部表达。当营养条件发生变化时,表达丰度不会发生变化,当猎物由天然猎物柑橘粉蚧Planococcus citri Risso变成碗豆修尾蚜Megoura japonica Matsumura时,表达量会明显下降。该结果表明,孟氏隐唇瓢虫的不同发育阶段、不同组织及猎物种类会影响Cmon OBP1基因的表达,从而进一步影响其嗅觉行为。同时,Cmon OBP1基因可能在雄虫相关的信息素感受过程中发挥着重要作用。

摘要: 选择合适的内参基因是qRT-PCR研究的关键。本文以孟氏隐唇瓢虫Cryptolaemus montrouzieri Mulsant为研究材料,利用qRT-PCR技术,对孟氏隐唇瓢虫4个候选内参基因Actin、RPS23、GAPDH和β-tubulin的mRNA的表达量进行了分析,并用Ge Norm、Norm Finder和Best Keeper软件分析它们在孟氏隐唇瓢虫不同发育阶段及成虫不同组织中的表达稳定性。结果表明,以成虫不同组织为材料时,综合三种软件分析结果显示4个候选基因表达稳定性平均等级值排名为RPS23(rank=1)>β-tubulin(rank=2.3)>GAPDH(rank=3)>Actin(rank=3.7),以不同发育时期虫体为材料时,综合分析结果显示4个候选内参基因表达稳定性平均等级值排名为RPS23(rank=1.7)>Actin(rank=2)>GAPDH(rank=2.7)>β-tubulin(rank=3.7)。综合分析在瓢虫不同发育阶段及成虫不同组织两种处理下,三种软件的评价效果,4个候选基因表达稳定性等级值的总平均排名为RPS23(rank=1.3)>Actin(rank=2.8)=GAPDH(rank=2.8)>β-tubulin(rank=3)。RPS23在瓢虫不同发育阶段及成虫不同组织中均显示出较高的表达稳定性及与其它基因之间极大的相关性,可以确定为孟氏隐唇虫不同发育阶段及成虫不同组织基因表达分析中一个稳定表达的基因,可作为单个内参基因或者其它内参基因的协同基因,本实验为开展孟氏隐唇瓢虫功能基因表达分析奠定了方法学基础。

摘要: 本文采用含有赤眼蜂人工培养液制成的人工饲料饲养孟氏隐唇瓢虫,观察其对瓢虫成虫寿命及产卵的影响,结果表明,用人工饲料喂养,保持成虫存活360天以上。用人工饲料喂养的成虫改喂粉蚧后,可恢复产卵能力。

摘要: 孟氏隐唇瓢虫Cryptolaemus montrouzieri是生物防治领域应用最广泛的天敌种类之一。为明确冷冻粉蚧对孟氏隐唇瓢虫的饲养效果，为其人工饲料开发提供科学依据，本研究开展以下试验：以孟氏隐唇瓢虫群体为研究对象，分别以新鲜粉蚧（CK）和冷冻粉蚧（T）饲喂，测定并比较其群体的化蛹率和羽化率；以孟氏隐唇瓢虫个体为研究对象，同样以新鲜粉蚧（CK）和冷冻粉蚧（T）饲喂，测定并比较其幼虫和蛹的发育历期以及雌雄成虫的体重；以上述试验2获得的成虫为研究对象，将以上2组成虫组内雌雄配对后再各分为2组，分别饲养新鲜粉蚧和冷冻粉蚧，即幼虫期和成虫期分别饲喂：新鲜粉蚧/新鲜粉蚧（CK）、新鲜粉蚧/冷冻粉蚧（T1）、冷冻粉蚧/新鲜粉蚧（T2）、冷冻粉蚧/冷冻粉蚧（T3），测定并比较4组雌虫的产卵前期和10 d产卵量。结果显示，取食冷冻粉蚧的孟氏隐唇瓢虫，其群体化蛹率和羽化率（90.00%和87.00%）与对照组（92.00%和90.00%）相比无显著性差异；幼虫和蛹的发育历期（15.42 d和11.48 d）均显著大于对照组（13.51 d和10.88 d），雌雄成虫的体重（10.82 mg和9.54 mg）均显著低于对照组（11.39 mg和9.94 mg）;CK和T1、T2和T3的产卵前期分别为7.20 d、8.29 d、7.42 d和8.31 d，孵化率分别为83.56%、81.50%、83.78%和81.91%，这两方面四者之间均无显著差异，CK的10 d产卵量（157.73）与T2(140.33)无显著差异，T1(57.30)与T3(58.77)无显著差异，但CK与T1和T3,T2与T1和T3之间均表现出极显著性差异。结果表明，以冷冻粉蚧饲喂孟氏隐唇瓢虫，对其化蛹率、羽化率、产卵前期和孵化率均无不良影响，但其幼虫和蛹的发育历期、雌雄成虫的体重以及产卵量均表现出显著的负面影响。虽然冷冻粉蚧无法直接替代新鲜粉蚧作为孟氏隐唇瓢虫规模化生产的饲料，但仍显示出较好的应用潜力。未来可以通过对冷冻粉蚧进行剂型加工改良和使用人工产卵介质等措施来提升其生长发育及生殖能力表现。