摘要: 目的比较大鼠双侧颈总动脉结扎后不同时程的神经功能障碍、脑组织大体病理/显微病理和血清学炎性指标的变化。方法将SPF级Wistar大鼠麻醉后,施行永久性双侧颈总动脉结扎术。造模成功的大鼠按随机数字表分为术后2周、4周和6周共3组,每组10只。同时设立假手术组,大鼠10只,操作方法同模型组,但只穿线不结扎。分别于术后2周、4周和6周对大鼠进行神经功能检测,然后腹主动脉取血,采用ELISA法检测血清白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量。采用脑组织TTC染色法评价脑缺血范围,HE染色后进行显微镜下脑组织形态学观察。结果与假手术组比较,双侧颈总动脉结扎后2周组、4周组和6周组大鼠的神经功能评分明显降低(P<0.05);与2周组比较,4周组和6周组大鼠的神经功能评分下降明显(P<0.05)。血清炎性指标检测发现,与假手术组比较,不同时程模型组大鼠的IL-6水平明显升高(P<0.05),其余两个指标的差异无统计学意义(P> 0.05)。大鼠脑组织病理学观察显示,与假手术组比较,双侧颈总动脉结扎后2周组、4周组和6周组大鼠的脑组织缺血范围随时程延长而增加,脑组织形态也都有不同程度的损伤和炎性浸润。结论大鼠双侧颈总动脉结扎后脑组织病理改变由缺血发展到梗死灶出现,并伴随神经功能障碍,随时程的延长而变化不同,应根据药物作用机制选择干预时机。

摘要: 目的基于L型电压依赖型钙通道探讨芍药苷改善大鼠抑郁焦虑样行为的药理作用机制。方法 48只大鼠分为正常组,L型钙通道激动剂Bayk8644组,芍药苷高、中、低剂量组(200 mg·kg^-1·d^-1、100 mg·kg^-1·d^-1、50 mg·kg^-1·d^-1),阳性对照尼莫地平组(1 mg·kg^-1·d^-1)。正常组和Bayk8644组给予相同剂量的0.9%NaCl溶液,其余组给予相应药物。连续给药7 d后,除正常组外,其余组腹腔注射Bayk8644(0.2 mg·kg^-1·d^-1)。利用旷场实验和高架十字迷宫实验评价大鼠行为学变化,蛋白质印迹法检测海马体脑区钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ（calmodulindependent protein kinase typeⅡ,CaMKⅡ）、磷酸化的CaMKⅡ（pho-CaMKⅡ）和脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor, BDNF）的表达水平。结果与正常组大鼠相比,Bayk8644组大鼠旷场总路程、中央区停留时间、中央区总路程及直立次数均明显下降（P <0.05或P <0.01）,大鼠进入开放臂次数百分比（OE%）和时间百分比（OT%）明显降低（P <0.05或P <0.01）,CaMKⅡ、pho-CaMKⅡ蛋白表达水平明显升高（P <0.05或P <0.01）,BDNF蛋白表达水平明显降低（P <0.05）。与Bayk8644组相比,芍药苷高、中剂量组旷场总路程延长,直立次数明显增多（P <0.05）,芍药苷高剂量组中央区总路程明显延长（P <0.05）,芍药苷高、中、低剂量组中央区停留时间明显延长（P <0.05）,芍药苷高剂量组的OE%、OT%（P <0.05或P <0.01）和芍药苷中剂量组的OT%明显升高（P <0.05）,芍药苷高剂量组大鼠CaMKⅡ和pho-Ca MKⅡ蛋白表达水平明显降低（P <0.05或P <0.01）,而BDNF蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论 Bayk8644能引起大鼠抑郁焦虑样表现,芍药苷能拮抗Bayk8644的作用。芍药苷可能通过抑制L型钙通道影响CaMKⅡ蛋白的活化,从而发挥其药理作用。

摘要: 目的基于网络药理学信息筛选方法,探究白藜芦醇(resveratrol,RSV)抗大鼠心肌缺血再灌注(myocardial ischemia-reperfusion,MI/R)损伤的作用,以及其在大鼠体内的作用机制。方法利用TCMSP数据库筛选RSV作用基因靶点,并利用GeneCards数据库筛选MI/R损伤相关靶基因。运用R语言软件对RSV和MI/R相关靶基因取交集,筛选得到RSV治疗MI/R损伤可能的靶基因,并通过Cytoscape软件绘制基因网络,筛选出核心靶基因;最后运用R语言软件对这些靶基因进行GO及KEGG通路分析。将30只SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血再灌注组(MI/R)和白藜芦醇给药组(RSV)。通过结扎左冠状动脉前降支诱导MI/R损伤大鼠模型,然后测定大鼠血浆中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ,cTnⅠ)含量以及心肌梗死面积。HE染色观察心肌结构,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学和蛋白质印迹法检测心肌组织中凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)表达。结果网络药理学信息筛选发现RSV治疗MI/R损伤的核心靶基因有86个,主要涉及细胞因子受体、磷酸酶结合和死亡受体等生物学过程,以及参与调控糖尿病并发症的AGE-RAGE信号通路和细胞凋亡信号通路。大鼠体内实验结果显示,相比于Sham组,MI/R组心肌组织中TRAIL蛋白表达水平明显升高(P <0.01),血浆LDH、CK及cTnⅠ含量明显增加(均P <0.01),心肌梗死面积增大,同时心肌组织中肌纤维排列紊乱,细胞凋亡率和caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2表达明显下调(P <0.05);而RSV组心肌纤维排列相对规则,LDH、CK、cTnⅠ含量及TRAIL蛋白表达量减少,心肌梗死面积减少,细胞凋亡率降低(均P<0.05)。结论 RSV可能通过调节TRAIL蛋白表达抑制细胞凋亡,从而逆转MI/R损伤。

摘要: 目的探讨川芎嗪对胶原诱导型关节炎大鼠细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)通路的影响。方法 30只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和川芎嗪组,每组10只。对模型组和川芎嗪组大鼠进行胶原诱导型关节炎造模,造模成功后川芎嗪组每日给予川芎嗪(0.1 g/kg),连续灌胃给药28 d;模型组、正常组给予相同体积生理盐水。每周测量3组大鼠的后足体积变化情况,采用HE染色法观察各组大鼠炎性细胞浸润情况,并采用实时荧光定量PCR和ELISA法检测大鼠滑膜组织及血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、血管生成素1(angiopoietin 1,Ang-1)、白细胞介素1β(interleukin1β,IL-1β)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平,以及采用蛋白质印迹法检测大鼠滑膜组织中ERK通路相关蛋白的表达水平。结果造模后第2周开始,模型组大鼠后足体积显著大于对照组(P <0.05),川芎嗪组大鼠后足体积与模型组同时间点比较显著降低(P<0.05);同时模型组和川芎嗪组大鼠血清和滑膜组织中炎性因子TNF-α、Ang-1、IL-1β及其mRNA表达水平均比对照组大鼠明显升高(P <0.05);川芎嗪组大鼠滑膜组织中VEGF水平相比模型组降低(P<0.05);模型组和川芎嗪组大鼠磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达水平均升高(P<0.05),但川芎嗪组大鼠p-ERK1/2蛋白表达水平明显低于模型组(P<0.05)。结论川芎嗪可能通过有效抑制ERK通路,调节胶原诱导型关节炎大鼠血清和滑膜组织中TNF-α、IL-1β水平,缓解关节肿胀症状。

摘要: 目的研究不同低氧胁迫方式构建高原肺水肿模型的效果。方法将60只SD大鼠随机分为3组:对照组(海拔400 m),低压氧舱组(模拟海拔6 000 m低氧胁迫48 h),实地低氧组(海拔4 200 m低氧胁迫28 d);每组20只。通过检测实验大鼠肺组织的干湿比、形态学和病理生理学特征、关键基因水通道蛋白1(aquaporin-1,AQP-1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达,以及氧化应激水平,比较不同低氧胁迫方式构建SD大鼠高原肺水肿模型的效果。结果与对照组相比,低压氧舱组和实地低氧组大鼠的肺动脉压和肺组织含水量均显著升高(均P <0.01),而氧分压及氧饱和度显著下降(均P <0.01)。对照组肺组织形态在光镜和电镜下均显示结构正常;低压氧舱组和实地低氧组肺组织在光镜下均可见肺泡壁且肺泡间隔明显增宽,大量红细胞和炎性细胞溢出,且在肺泡间隔出现明显水肿。两实验组大鼠肺组织中AQP-1 mRNA和蛋白水平均较对照组明显升高(均P <0.01),VEGF mRNA和蛋白水平均较对照组明显降低(均P <0.01),而且血清中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平明显降低,丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平明显升高。结论低压氧舱模拟海拔6 000 m低氧胁迫48 h,以及海拔4 200 m实地低氧胁迫28 d,均可有效构建SD大鼠高原肺水肿模型;其中,应用低压氧舱构建SD大鼠高原肺水肿模型相对更占优势。