摘要: 从大鲵皮肤cDNA文库中,筛选出大鲵铁蛋白重链AdFTH的cDNA序列,其全长为864 bp,开放阅读框为531 bp,编码176个氨基酸,5′和3′非翻译编码区(Untranslated region,UTR)分别为120 bp和214 bp,预测蛋白质的分子量为20.6 kD,理论等电点PI为5.41,预测蛋白无信号肽及跨膜结构,在5′-UTR的22—51 bp处有一个特殊的铁反应元件(Iron response element,IRE)。同源性和系统进化分析表明,铁蛋白重链在进化上有着较高的保守性。实时定量PCR结果表明,大鲵铁蛋白重链mRNA在各个组织中广泛表达,其中肝脏的表达量高于其他8种组织,表明肝脏是大鲵主要的参与铁储存代谢的器官。成功构建了大鲵铁蛋白重链的重组表达载体pET32a-AdFTH,利用大肠杆菌Escherichia coli BL21表达系统和Ni2+亲和层析方法,获得了纯度较高的重组大鲵铁蛋白,并证实重组大鲵铁蛋白(Recombinant AdFTH protein,rAdFTH)具有氧化和吸收铁离子的功能,为进一步制备AdFTH抗体了解其在大鲵体内的多种作用机制打下坚实的基础。

摘要: 为了更好地了解大鲵在感染蛙病毒过程中的生理生化及抗病毒反应,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)辅以密度分析,对大鲵正常血清和感染血清、正常黏液和感染黏液的蛋白图谱分别进行测试比较。结果显示:在正常血清(CS)、包括自然感染血清(NS)和人工感染血清(AS)在内的感染血清中,蛋白带集中在60—80 k D,其含量超过血清蛋白总量的42%;正常血清在14—57 k D之间有16条蛋白带:57、53、50、43、40、38、36、31、27、26、25、22、16、15.5、15和14 k D,其中正常与感染血清(包括NS和AS)比较,有10条共有蛋白带:57、43、40、31、27、26、25、15.5、15和14 k D和4条差异蛋白带:53、33、22和16 k D。正常黏液(CM)和感染黏液(NM或AM)共有11条蛋白带:116、100、75、57、53、45、27、18、17、16和15 k D,但感染黏液多出7条蛋白带:90、52、43、32、26、20和13 k D。还有些蛋白带含量出现变化,如45 k D条带在CM中占总蛋白量的19.3%,而在AM中仅占总蛋白的3.8%。研究证实蛙病毒感染能导致大鲵黏液和血清蛋白图谱发生变化,也为深入探寻两栖类抗病毒相关的蛋白生物标记提供了有价值的信息。

摘要: 实验构建了大鲵短型肽聚糖识别蛋白PGRP-S的真核表达质粒,并对其功能进行了初步的研究。序列分析显示,所克隆的大鲵PGRP-S的N端不含有信号肽;其编码的氨基酸序列具有2个相距较近的半胱氨酸残基以及2个Zn2+结合位点。Western-blotting检测结果显示大鲵PGRP-S既可分泌到胞外,也可滞留在胞内。体外抗菌实验的结果表明,过表达大鲵PGRP-S能显著抑制迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)在HEK293T细胞内和胞外培养基中的增殖。此外,过表达大鲵PGRP-S能诱导NF-κB启动子的活性;能结合Lys-type和Dap-type的肽聚糖但不能降解它们。研究结果表明大鲵PGRP-S在功能上类似于哺乳动物而有别于硬骨鱼类短型的肽聚糖识别蛋白。

摘要: 通过投喂甘草提取物,研究了甘草对大鲵(Andrias davidianus)抗嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染的作用。连续投喂56d,从28d开始,药物组血清溶菌酶活性先升后降,呈抛物线趋势,低剂量组在42d出现最大值(158.4±34.7) U/mL,高剂量组在35d出现最大值(178.3±28.8) U/mL,两者都显著高于同期对照组(P<0.05)。药物组在最后两次采样期,即42d和56d时,肾脏巨噬细胞吞噬活性显著高于对照组(P<0.05)。低剂量组和高剂量组最大值均出现在42d,分别为(59.4±8.5)%和(58.4±5.2)%。同期相比,药物组白细胞比容值均高于对照组。其中,高剂量组在28d时白细胞比容值为(5.8±1.7)%,低剂量组在56d时为(5.5±0.8)%,高剂量组在56d时为(5.9±1.7)%,三者都显著高于同期对照组(P<0.05)。药物组和对照组的脾脏脏器系数之间没有显示出显著差异。最后一次采样(56d)后人工感染嗜水气单胞菌,对照组死亡率为90%,低剂量组和高剂量组都为60%,均低于对照组,而药物组免疫保护率为33.3%,也都高于对照组。结果表明,投喂甘草提取物可在一定程度上提高大鲵对嗜水气单胞菌的抗性。

摘要: 为研究紫苏叶在大鲵日粮中的生物学效果,配制4组不同紫苏叶含量的等氮等脂实验饲料:D0(0)、D1(1%)、D2(2%)和D3(3%),饲喂初始体质量为(54.23±0.26) g的大鲵105d。结果显示:(1)大鲵终末均重(FBW)、增重率(WGR)、特定生长率(SGR)和摄食量均在D2组达到最优,且饲料系数(FCR)最低。(2)D2组肌肉粗蛋白含量最优,显著高于对照组;粗脂肪含量随紫苏叶添加量增加有下降趋势,但不显著;水分含量变化不明显。(3)紫苏叶添加能显著提高胃肠功能,胃蛋白酶活性、H+-K+-ATP酶活性在D1组最佳;肠道脂肪酶活性、Na+-K+-ATP酶活性及肠道屏障功能在D2组最佳;肠道胰蛋白酶活性和淀粉酶活性在D3组最佳。(4)当紫苏叶添加量为2%时,肝脏和肠道总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性显著升高,血浆丙二醛(MDA)含量显著降低。(5)紫苏叶添加能改善免疫及肝功能,显著降低血浆中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(AKP)活性;免疫球蛋白M(IgM)和一氧化氮(NO)含量分别在D2和D3组显著提高。(6)D2组的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)指标最为理想;总胆固醇(TC)含量则随紫苏叶添加量的增加而降低,甘油三酯(TG)含量无显著变化。研究表明,日粮中2%紫苏叶添加在改善大鲵生长性能和胃肠肝功能等方面的综合效果最佳。