摘要: 大熊猫脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)通过旁分泌所释放的外泌体在大熊猫保健与疾病治疗方面具有一定的应用前景。本研究旨在建立大熊猫UC-MSCs外泌体分离方法，开展生物学特征分析和分子鉴定，并研究UC-MSCs外泌体中miRNAs的种类与功能。采用超速离心法从大熊猫UCMSCs培养上清中成功分离外泌体，通过透射电子显微镜进行形态学观察，纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径大小，蛋白免疫印迹法检测特异性分子标记表达。采用Small RNA测序技术对UC-MSCs外泌体中的miRNAs进行鉴定，并对其靶基因进行了预测与功能分析。结果显示，大熊猫UC-MSCs外泌体呈圆形杯托状结构，直径为(79.15±4.81) nm，外泌体标志蛋白CD81与TSG101呈阳性表达而CALNEXIN呈阴性表达。大熊猫UC-MSCs外泌体中的miRNA主要为miR-148-3p (30.28%)与miR-21-5p (21.72%)。本研究首次从大熊猫UC-MSCs培养上清中分离出外泌体，并对其所含的miRNAs进行富集分析及功能预测，为大熊猫UC-MSCs外泌体后续的功能研究及应用奠定基础。

摘要: 本文以2010—2020年15只母兽带仔野化培训的大熊猫幼仔为研究对象，基于红外视频监控系统观察和音频颈圈解译获得的行为资料、GPS颈圈跟踪定位采集的粪样数据，分析了野化培训大熊猫幼仔的行为发育进程和食性转换特征。结果表明：随着野化培训大熊猫幼仔的生长发育，与觅食和警戒相关的行为得到充分发育，且具有较强的时间关联性，包括食乳、爬行、走动、玩耍物品、爬树、咬玩竹子、饮水和采食竹子等。8～10月龄的大熊猫幼仔开始取食竹子，其发育性食性转换过程划分为3个阶段：食乳期(1～7月龄)、食母乳—食竹子转换期(8～28月龄)和食竹期(29～39月龄)，其中转换期细分为关键期(8～18月龄)和过渡期(19～28月龄)。从统计检验来看，不同食性阶段间差异显著；过渡期的大熊猫幼仔可离开母兽独立生活，此阶段大熊猫幼仔食物组分比例与食竹期相比无显著差异。野化培训大熊猫幼仔的季节性食性转换规律与带仔母兽和野生大熊猫具有相似的格局，即春季主要取食竹笋，夏、秋季则以嫩竹茎和竹叶为食，冬季采食竹叶与竹茎。

摘要: 对圈养大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)开展长期行为监测能及时了解其所处生理周期和健康状况，有助于繁殖饲养机构迅速采取相应繁育保护措施提高饲养管理水平，但目前无法对大熊猫进行24 h监控并及时地获得相应的行为信息。准确的动物姿态估计是动物行为研究的关键，也是诸多下游应用的基础。了解大熊猫的姿态可以促进大熊猫行为研究并提升保护管理水平。为了提高复杂环境下大熊猫姿态估计的准确率，本文以高分辨率网络(High resolution net, HRNet)为基础网络架构提出了一种大熊猫姿态估计方法：针对大熊猫不同部位尺度差异较大的问题，在HRNet-32中引入了空洞空间金字塔池化(Atrous spatial pyramid pooling, ASPP)模块，在提升特征感受野的同时捕获多尺度信息；同时对大熊猫身体关键点进行分组，引入基于部位的多分支结构来学习特定于每个部位组的表征。多次对比实验结果表明本文所用模型具有较高的检测精度：在PCK@0.05中所用模型精度达到了81.51%。本文提出的方法可为大熊猫的行为分析和健康评估提供技术支撑。

摘要: 大熊猫是中国特有的珍稀物种，西氏贝蛔虫是危害大熊猫最为严重的一种肠道寄生性线虫。针对目前长期药物驱虫导致的大熊猫西氏贝蛔虫耐药及生态污染问题，苏力菌(Bacillus thuringiensis, Bt)晶体蛋白Cry5B因其特异的线虫杀灭活性，是一种理想的新型抗蛔虫病药物候选。本研究拟通过原核表达方式产生Bt YBT-1518重组Cry5B蛋白，并评价其对大熊猫西氏贝蛔虫的离体杀灭活性。结果表明，BtYBT-1518 Cry5B由1 246个氨基酸组成，分子量(MW)为139.889 kDa，包含Endotoxin＿N、δ-Endotoxin＿C、Endotoxin＿C、Endotoxin＿C2、Cry1Ac＿D5结构域，与BtPS86Q3晶体蛋白关系最近。重组Cry5B蛋白在IPTG浓度为1.4 mmol/L时表达量最大，表达于菌体上清液。离体杀灭活性实验表明，重组Cry5B蛋白的大熊猫西氏贝蛔虫抑杀效果具有显著的剂量依赖性，对肠道L4期幼虫第3天的ED50值为14.5μg/mL，第7天的ED50值为0.16μg/mL；但对成虫更敏感，仅作用2 d便可显著下降虫体活性，直至死亡，证实重组Cry5B蛋白对大熊猫蛔虫具有较强的毒杀作用。这些结果为后续论证Bt YBT-1518重组Cry5B蛋白可以作为一种新型、环保的抗大熊猫西氏贝蛔虫病药物提供了数据参考。

摘要: 在过去34年的圈养大熊猫种群保护工作中，我们成功建立了全球最大的大熊猫精子库，目前已保存50只大熊猫个体总计7 000余支细管冷冻精液(冻精)。冷冻精液一方面可以使物种的遗传资源得到长久保存，另一方面可以通过人工授精的方式促进种群繁育。但是，圈养大熊猫冷冻精液对其种群遗传多样性的作用尚未有明确报道。本研究首先根据成都大熊猫繁育研究基地2000—2014年冷冻精液人工授精数据，对比分析了冻精人工授精个体和圈养种群的遗传多样性。结果显示，冻精人工授精个体遗传多样性均高于同年圈养种群的平均遗传多样性，表明在繁殖年份中冻精人工授精可以显著提高圈养大熊猫种群的遗传多样性。统计精子库中所有冻精个体的平均血缘系数并与圈养种群进行对比分析，探究冷冻精液对圈养种群遗传多样性的潜在作用。结果显示，精子库中有21只已死亡个体的精液，其中有66.67%的个体平均血缘系数低于圈养种群；有14只20岁以上个体的精液，其中有50.00%的个体平均血缘系数低于圈养种群；另有15只20岁以下个体的精液，其中有53.33%的个体平均血缘系数低于圈养种群，表明冷冻精液对圈养种群遗传多样性的保护具有重要价值。综上所述，冷冻精液不但有效保存了大熊猫遗传资源，而且在保护圈养种群遗传多样性方面具有积极的促进作用。