摘要: 为了研究Interruptin B的杀虫活性,初步探讨其杀虫作用机理,本研究采用叶碟法和叶片浸渍法测定了Interruptin B对小菜蛾Plutella xylostella和亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis3龄幼虫的拒食活性和毒杀活性;采用注射法和血球计数法研究对斜纹夜蛾Spodoptera litura幼虫血细胞数的影响;采用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法测定对斜纹夜蛾卵巢细胞(SL细胞)的增殖抑制作用;采用倒置显微镜观察对SL细胞形态、密度和贴壁率的影响。结果显示:处理后48h,Interruptin B对亚洲玉米螟和小菜蛾3龄幼虫的拒食中浓度(AFC50)分别为108.56和143.88μg/mL,致死中浓度(LC50)分别为346.23和194.32g/mL;处理后24h和48h,对SL细胞的抑制中浓度(IC50)分别为13.51和4.11g/mL。Interruptin B处理SL细胞后12-48h,细胞密度随时间的延长而下降,与对照差异显著(P<0.05);处理后3,6,12,24和48h,SL细胞变形率分别为28.18%,83.90%,85.18%,93.93%和100%,细胞贴壁率分别为96.59%,89.90%,83.18%,5.06%和1.09%,处理后6-48h,SL细胞变形率和贴壁率与对照差异显著(P<0.05)。Interruptin B对小菜蛾和亚洲玉米螟3龄幼虫具有良好的拒食和毒杀活性,能显著降低斜纹蛾幼虫血细胞数量,对SL细胞具有良好的增殖抑制作用,可显著降低SL细胞生长密度,改变细胞形态,降低贴壁率,表明该化合物可通过影响昆虫细胞活力毒杀活体昆虫。

摘要: 为了更全面地评价转Bt基因作物对甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hbner)(鳞翅目:夜蛾科)的影响,在室内研究了甜菜夜蛾低龄幼虫连续6d取食含不同浓度Cry1Ac毒素的人工饲料后转移到不含毒素的饲料上,其生长发育与成虫繁殖的变化。结果表明:低龄幼虫取食含Cry1Ac的饲料6d内,校正死亡率随Cry1Ac浓度的升高以及取食时间的延长而升高。与一直取食不含Cry1Ac饲料的对照相比,取食含Cry1Ac饲料的幼虫体重显著下降;幼虫历期、预蛹期及雌雄蛹期均显著延长,但雌雄蛹重均与对照无显著差异;幼虫化蛹率显著下降,但羽化率与对照无显著差异;成虫产卵前期显著延长,产卵期与对照无显著差异,仅在5μg/g处理下较对照显著延长1.3d;每雌产卵量以10μg/g处理最高(719粒),但各处理均与对照无显著差异;雌蛾寿命均显著延长,而雄蛾寿命仅在最高浓度80μg/g下显著延长2.4d。这表明,尽管含不同浓度Cry1Ac毒素的饲料对甜菜夜蛾低龄幼虫有明显的生长发育抑制作用或导致死亡,但转移至不含毒素的饲料上取食后,幼虫能迅速恢复生长,顺利化蛹、羽化并产卵。因此,在转Bt基因作物田生长后期,甜菜夜蛾低龄幼虫取食表达Cry1Ac蛋白的组织若能存活并完成世代发育和繁殖,这无疑将增加甜菜夜蛾对Bt作物产生抗性的风险,因此亟需制定Bt作物生态系统中甜菜夜蛾的治理策略。

摘要: 植物在受植食性昆虫为害时能产生防御反应,并且植物的茉莉酸信号转导途径在这一过程中发挥着重要作用。然而,迄今为止对于油菜Brassica campestris的诱导防御反应很少有研究报道。为此,本实验通过测定油菜内茉莉酸和胰蛋白酶抑制剂含量研究了油菜在斜纹夜蛾Spodoptera litura幼虫为害后的抗虫性和胰蛋白酶抑制剂含量的变化,并分析这些变化在油菜诱导抗虫性与茉莉酸信号转导途径中的关系。结果表明:斜纹夜蛾幼虫取食能导致油菜体内茉莉酸和胰蛋白酶抑制剂含量系统性上升,外用茉莉酸甲酯处理也能系统性增加油菜的胰蛋白酶抑制剂含量,并且取食茉莉酸甲酯处理或斜纹夜蛾幼虫取食过的叶片能显著降低斜纹夜蛾幼虫的体重,两者的体重分别为对照植株上的67.5%和60.2%。机械损伤加斜纹夜蛾幼虫口腔分泌物处理能引起处理叶中茉莉酸和胰蛋白酶抑制剂含量的增加,但其诱导效果与机械损伤加水没有显著差异,并且两者明显低于虫害的诱导效果,两种处理的茉莉酸和胰蛋白酶抑制剂含量分别为虫害诱导的68.4%和24.4%及62.9%和36.9%;多次连续机械损伤的诱导效果与一次损伤的没有明显差异。结果说明斜纹夜蛾幼虫诱导的油菜抗虫性与茉莉酸信号转导途径有关,而其激活油菜抗虫反应的机理则可能与其特定的取食行为相关。

摘要: 昆虫肠粘蛋白(invertebrate intestinal mucin,IIM)是围食膜(peritrophic membrane,PM)的重要蛋白组分之一,在保护昆虫免受微生物侵染方面起着非常重要的作用。本研究以甜菜夜蛾Spodoptera exigua5龄幼虫中肠总RNA为模板,根据已知的甜菜夜蛾肠粘蛋白SeIIM-8基因的cDNA序列(GenBank登录号:ABW06596)设计引物,利用RTPCR技术扩增得到甜菜夜蛾肠粘蛋白基因SeM-8,序列分析发现其开放阅读框(open reading frame,ORF)长2703bp,编码900个氨基酸残基,预测分子量为95.7kDa。序列分析表明,其氨基酸序列(GenBank登录号:GU255994)与棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)、粘虫Mamestra configurata和小菜蛾Plutella xylostella肠粘蛋白的一致性分别为48%,49%和45%。Western blot分析结果表明,SeM-8粘蛋白在甜菜夜蛾即将孵化的卵和5龄幼虫的围食膜、中肠和粪便中都有存在,在5龄幼虫马氏管、脂肪体、唾腺、血淋巴等组织部位没有发现。本研究为进一步研究IIM结构和功能,寻找生物防治新靶标奠定了理论基础。

摘要: 为了明确印楝素A和B活性差异的机理,本研究比较了印楝素A和印楝素B对粉纹夜蛾Trichoplusia ni离体培养胚胎细胞系BTI-Tn-5B1-4的毒性。结果表明:印楝素A与印楝素B对BTI-Tn-5B1-4细胞具有良好的增殖抑制活性,处理后3d,其IC50值分别为2.09μg/mL和9.85μg/mL,印楝素A的细胞毒力显著高于印楝素B。倒置显微镜观察发现,印楝素A和印楝素B处理可导致细胞变形,贴壁能力下降,并出现明显空泡,印楝素A的影响明显高于印楝素B。流式细胞仪检测结果表明,印楝素可导致BTI-Tn-5B1-4细胞体积显著膨大,印楝素A处理细胞体积增大程度显著高于印楝素B;印楝素可以明显影响BTI-Tn-5B1-4细胞膜电位,1.25μg/mL印楝素A和印楝素B处理后3d,细胞DiBAC4(3)荧光强度分别增加88.12%和55.37%,印楝素A的影响显著高于印楝素B。荧光显微镜观察发现,印楝素对BTI-Tn-5B1-4细胞核具有明显影响,印楝素B的影响明显高于印楝素A,印楝素B处理后,细胞核受损细胞数更多,受损程度更严重。结果显示印楝素A和印楝素B的细胞作用机理存在差异,本研究从细胞学水平解释了印楝素的生长发育抑制作用机理。