摘要: 为了深入了解精氨酸激酶基因的作用和寻求害虫防治新的分子靶标,本研究采用RT-PCR和RACE技术,从烟夜蛾Helicoverpa assulta脂肪体中克隆了精氨酸激酶cDNA序列,命名为HassAK(GenBank登录号:HQ336337),并采用荧光定量PCR测定了HassAK基因在不同发育阶段(4龄幼虫第1天到化蛹第1天)、不同组织(头部、中肠、脂肪体、体壁和腹足)和不同温度条件下的表达情况。测序和序列分析结果表明,HassAK基因阅读框架全长1068bp,编码355个氨基酸残基,预测蛋白质分子量和等电点分别为40.0kD和5.76。氨基酸序列分析表明,该序列具有精氨酸激酶典型的酶活性部位、酶活性中心位点和能形成离子偶结构的保守区。序列比对结果表明,HassAK与其他昆虫AK的氨基酸序列具有70%以上的一致性。荧光定量分析结果显示,HassAK基因在幼虫头部、中肠、脂肪体、体壁和腹足均可表达,其中以腹足和中肠内的表达水平较高。时序表达分析表明,预蛹期HassAK基因的表达量达到高峰。此外,高温和低温均诱导HassAK基因的表达,说明该基因可能参与昆虫抵御外界不良环境。

摘要: Fe-S蛋白(rieske iron-sulfur protein,RISP)是线粒体复合物Ⅲ的关键蛋白亚基之一,在呼吸链电子传递中起着重要作用。本文利用RT-PCR技术和RACE方法获得了斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fab.)线粒体复合物ⅢRISP基因,该基因序列全长4413bp,含有3个内含子;开放阅读框长816bp,编码271个氨基酸。经氨基酸序列比对,与鳞翅目家蚕Bombyx mori和小菜蛾Plutella xylostella的Fe-S蛋白一致性较高,分别为83%和79%,与其他目昆虫的RISP一致性较低。qRT-PCR分析结果表明,SlitRISP基因在斜纹夜蛾不同发育阶段的表达水平存在显著差异,即幼虫期和成虫期的表达量显著高于卵期和蛹期,其中幼虫期又以第4和5龄幼虫表达水平显著高于初孵幼虫以及第1,2,3和6龄幼虫。斜纹夜蛾SlitRISP基因的克隆成功为今后对其功能研究以及作为靶标设计新型高效杀虫剂提供了基础。

摘要: 为探明谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)在昆虫嗅觉识别中的作用,本研究采用RT-PCR和RACE方法,从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guenée)雄虫触角中克隆获得了1个GSTs基因的全长cDNA序列(GenBank登录号为EU289223)。将该基因推导的氨基酸序列与其他物种的GSTs进行同源性比对和系统发育分析,发现该蛋白属于昆虫特异性Epsilon家族成员,因此将该基因命名为HaGSTe1。同时从烟夜蛾基因组DNA中克隆获得了该基因序列,发现序列中含有5个内含子,长度分别为415,513,296,333和269bp。利用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR方法对HaGSTe1在雌、雄虫不同组织的表达进行了定性和定量分析,结果显示,该基因在雌、雄虫的头部(去掉触角和喙)、触角、喙、胸、足、翅以及雌虫的腹部均有表达,并且在雄虫触角中的表达量最高,且显著高于雌虫触角,这种表达情况提示其可能与触角中性信息素及其他外源物质的分解有关。

摘要: 甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hbner)是我国多种农作物上的重要害虫,在我国许多地区频繁暴发成灾。为探索甜菜夜蛾种群动态规律并建立种群数量发生趋势预测模型,作者应用时间序列分析和逐步回归分析方法研究了我国广域(较大范围)温度和广域降雨量变化趋势对我国广域甜菜夜蛾年暴发频度的影响规律。结果表明:甜菜夜蛾发生的长期趋势和年间波动状况均与广域温度和广域降雨量具有复杂的影响关系。在1979-2008年间,我国甜菜夜蛾暴发频度呈现出波浪式上升趋势,其暴发指数平均年递增率为0.076,而我国广域温度(以27个省市级气象台数据统计为例)在1990-2008年间的平均年递升率为0.039℃,即我国甜菜夜蛾暴发频度上升趋势与我国广域温度升高趋势同向而行。作者从52个因素(当年和上年1-12月各月及全年日均温和月均降雨量)中筛选出了具有显著回归影响(P<0.05或0.01)的10个因素进入回归模型,初步找出了能够预测广域甜菜夜蛾暴发趋势指数的温度与降雨量或其组合因素,并使其模型达到99%以上的历史符合率和预测准确度。作者认为,广域温、雨因素与广域甜菜夜蛾暴发趋势指数的这种密切相关性,不是偶然的巧合,而是必然的环境(温度和降雨量)作用于生物(甜菜夜蛾)的因果关系。

摘要: 从尚未涉及的昆虫种类中建立新的细胞系能为基础研究和生物技术应用提供重要资源。本实验通过细胞培养技术,建立了3株来源于鳞翅目昆虫烟草天蛾Manduca sexta卵组织的新细胞系,分别命名为QB-Ms1-8,QB-Ms2-2和QB-Ms2-7。这3株细胞已经培养在TNM-FH培养基中,28℃条件下传代培养了约50代,大部分细胞呈梭形,细胞群体倍增时间分别为51,31和49h。虽然这3株细胞系对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)不够敏感,侵染后96h感染率在33%40%之间,但是QB-Ms2-2细胞与BTI-Tn5B1-4细胞比较,分泌型碱性磷酸酶(SEAP)活性表达更高。本研究从建立的3株烟草天蛾新细胞系中筛选出SEAP高表达的细胞系QB-Ms2-2,为进一步细胞克隆和筛选提供了新资源。