摘要: 绿僵菌素A和B是生物活性分子,本研究用MTT法、相差显微观察、荧光倒置显微观察和流式细胞术比较了绿僵菌素A和B对斜纹夜蛾Spodoptera litura SL-1细胞的毒杀作用。结果表明:绿僵菌素A和B对SL-1细胞均具有明显的增殖抑制作用,且具有正比的时间-浓度-效应关系,绿僵菌素A和B处理细胞48h后的IC50值分别为7.80和20.73μg/mL。倒置相差显微观察发现,绿僵菌素A和B可以引起SL-1细胞变圆、胞膜收缩、有凋亡小颗粒形成。随着时间的延长,细胞悬浮致死并出现大量空泡和胞质外泄现象。但是在同样的处理浓度下,绿僵菌素A的作用较绿僵菌素B明显。用AO/EB染色后,荧光显微观察发现:绿僵菌素A诱导的细胞荧光强度高于绿僵菌素B。流式细胞仪检测结果表明:绿僵菌素A和B对SL-1细胞具有明显的致凋亡作用。10μg/mL绿僵菌素A和B作用细胞48h后,SL-1细胞的总凋亡率分别达78.88%±0.97%和72.23%±2.29%。本研究从细胞水平肯定了绿僵菌素具有良好的增殖抑制和致凋亡作用,并且为它在害虫防治中的潜在应用提供了一些理论支持。

摘要: 斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura multinucleocapsid nucleopolyhdrovirus,SpltMNPV)X17株是采用活体克隆法自SpltMNPV日本小笠原株分离的病毒克隆。为了揭示X17病毒株基因型,根据已发表的SpltMNPVⅡ基因组全序列(GenBank登录号:NC_011616)设计引物,PCR扩增多角体蛋白基因(polh),并与SpltMNPV不同基因型及37种其他核型多角体病毒(NPV)作分子进化比较。系统发育树显示:SpltMNPV分为SpliNPV(A)型、SpltMNPV(B)型和SeMNPV(C)型3种基因型,此结果与前人利用基因组酶切图谱的研究结果一致。X17与SpltMNPV-1和SpltMNPVⅡ处于一个分支,属于SeMNPV(C)基因型,与A型和B型相距较远。此外,扩增了X17病毒基因38.7kD,Lef-1,Lef-9,fp,p10和p74,并与SpltMNPV,SpltMNPVⅡ,SeMNPV和SfNPV的同种基因进行同源性比较。结果表明,基于这6个ORF,X17与SpltMNPV同源性最低,其中Lef-9的氨基酸序列一致性最高,也仅为69%,38.7kD的氨基酸序列一致性只为26%。多数基因X17与SpltMNPVⅡ和SeMNPV的同源性较高,其中fp25K的氨基酸序列一致性最高,分别达95%和96%;但也有些基因同源性较低,如38.7kD的氨基酸序列一致性均为64%。因此,X17应是SpltMNPVC基因型的一种新毒株,命名为SpltMNPVⅡ-1。该研究为X17病毒株的进一步研究利用奠定基础。

摘要: 传统植物源杀虫剂喜树碱具有优异的抑制昆虫生长发育活性,其诱导昆虫细胞凋亡的作用方式和机制尚不明确,极大地限制了喜树碱在植物保护领域的应用开发。本研究以1μmol/L喜树碱诱导草地贪夜蛾Spodopterafrugiperda Sf9细胞呈现细胞皱缩、微绒毛消失和染色质边集等典型细胞凋亡早期超微结构形态特征,中期凋亡小体逐渐出现并急剧增多,DNA电泳分析可见清晰DNA片段化凋亡特征。流式细胞术分析表明1μmol/L喜树碱诱导Sf9细胞12h凋亡率达到最大值39.67%,是对照的13.13倍,随后减小。喜树碱诱导Sf9细胞凋亡在12h和24h时Sf caspase-1分别出现两个活性高峰,表明其作为效应因子在细胞凋亡级联反应过程中具有影响作用。喜树碱显著抑制Sf9细胞拓扑异构酶Ⅰ活性,阻断解旋负超螺旋pBR322DNA,导致DNA损伤进而启动细胞凋亡级联反应使Sfcaspase-1活性增加,提示其信号转导过程是细胞凋亡诱导机制之一。本研究通过分析喜树碱的诱导昆虫Sf9细胞凋亡,对揭示喜树碱诱导昆虫细胞凋亡的作用机制具有重要启示和帮助。

摘要: 为提升杀虫剂防效,减少杀虫剂用量,提高农产品安全,本研究采用虫体浸渍法研究了阳离子助剂1227和C8-10及有机硅助剂Breakthru S240对高效氯氰菊酯、毒死蜱和溴虫腈在甜菜夜蛾Spodoptera exigua幼虫和棉铃虫Helicoverpa armigera幼虫上的增效作用,并测定了3种助剂对清水物理性状的影响。结果表明:(1)供试助剂在两试虫上对3种杀虫剂均有显著增效作用,且增效比与助剂浓度存在显著相关关系。相同浓度下,除Breakthru S240对毒死蜱在棉铃虫上增效作用高于1227外,3种助剂在两试虫上对3种杀虫剂增效作用均为C8-10>1227>BreakthruS240。3种助剂在甜菜夜蛾上对3种杀虫剂的最佳增效浓度均为900mg/L。3种助剂在棉铃虫上对3种杀虫剂的最佳增效浓度分别为900,300和900mg/L。(2)3种助剂对清水物理性状均有显著影响。相同浓度下,供试助剂对清水表面张力的降低能力、对扩展直径和最大稳定持留量的增强能力均为Breakthru S240>1227>C8-10。综上所述,阳离子助剂1227和C8-10对3种杀虫剂在两试虫上的增效作用显著高于有机硅助剂Breakthru S240,但后者对于提高杀虫剂在叶表沉积量的能力高于前者,研究结果为3种助剂在杀虫剂领域的应用提供了一定的依据。

摘要: 气味调控斜纹夜蛾Spodoptera litura的觅食、交配和产卵等行为,而嗅觉受体(olfactory receptor,OR)作为气味的直接受体,是嗅觉神经信号产生的起点,是嗅觉信息的编码及信号的传递通路的重要组成部分。本研究通过RT-PCR和Western blot技术,对斜纹夜蛾嗅觉受体基因Ⅱ(Spodoptera litura olfactory receptor geneⅡ,SlitOR2)(GenBank登录号:DQ845292)的组织特异性和不同发育阶段表达情况进行分析鉴定。半定量RT-PCR研究结果表明,SlitOR2主要在成虫期的触角中表达,其他部位和发育期未检测到表达。Western blot鉴定结果表明SlitOR2主要在成虫触角表达,与半定量RT-PCR结果基本一致。但在成虫足、头和中期蛹中也看到有微量蛋白表达。可能是与目的蛋白大小类似的其他非特异性蛋白条带,也可能是该蛋白在成虫足部、头部和中期蛹中有微量表达,因为足部的跗节和头部的口喙也分布有少量的嗅觉感器。目的条带单一清晰,表明制备的多肽抗体特异性较好,可以用于后续相关实验。