摘要: 采用RT-PCR方法从斜纹夜蛾Spodoptera litura脂肪体组织中扩增得到了Cecropin D成熟肽基因序列,分析发现Cecropin D成熟肽与斜纹夜蛾Cecropin B之间存在2个氨基酸残基的差异。将获得的基因序列连接入原核表达载体pGEX-4T-1,并在原核细胞中实现了该蛋白的融合表达。SDS-PAGE结果表明,诱导后的宿主菌比未诱导菌中多出了一条融合蛋白表达带,诱导后1h就可以检测到该蛋白,从诱导后1h到5h该蛋白在表达量上没有明显的差异。生长曲线显示在IPTG诱导后宿主菌的生长受到明显的抑制,纯化后的蛋白对细菌具有一定的抑制作用。

摘要: 虫酰肼是目前防治甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)的一种主要杀虫剂,为评估其抗性风险,在室内进行了抗性筛选和交互抗性的研究。采用饲料感染法,在甜菜夜蛾饲养75代期间用虫酰肼筛选62代,与起始种群相比抗性上升39.2倍,与室内敏感品系相比抗性上升141.3倍。在筛选的早、中、后期,现实遗传力h2分别为0.1075(F0F25)、0.2780(F26F50)和0.0538(F51F75),整个筛选62代现实遗传力为0.1556。抗性种群筛选43次(F55)后停止用药筛选,饲养21代后,与敏感品系相比,抗性水平由63.5倍下降到21倍,抗性下降3倍。说明甜菜夜蛾具有对虫酰肼产生抗性的风险,且抗性衰退缓慢,短期内很难恢复到敏感水平。交互抗性测定结果表明,上述室内选育的抗性品系对甲氧虫酰肼具有71.4倍的高水平交互抗性,对阿维菌素具有13.1倍的中等水平交互抗性,对甲维盐、茚虫威和呋喃虫酰肼分别具有7.0、8.4和4.7倍的低水平交互抗性,但对溴虫腈交互抗性不明显(1.9倍)。结果提示:间断交替使用虫酰肼可以延缓抗性的发展,但除溴虫腈外,虫酰肼和其他几种新型杀虫剂之间的轮用可能不是甜菜夜蛾抗性治理的有效策略。

摘要: 研究了闹羊花素Ⅲ对斜纹夜蛾Spodoptera litura离体培养细胞(SL细胞)的活性,并测定了对SL细胞Na+、K+和葡萄糖吸收以及对4龄幼虫血细胞数量的影响。结果表明:以400μg/mL和200μg/mL闹羊花素Ⅲ处理SL细胞,24h后细胞的相对死亡率为79.00%和56.69%,处理后8h,16h,24h和48h的LC50分别为240.09μg/mL,173.45μg/mL,113.56μg/mL和73.40μg/mL;闹羊花素Ⅲ处理SL细胞后10min,细胞对离子的吸收迅速增加,30min后吸收作用逐渐减弱;处理后3天内细胞对葡萄糖的吸收迅速增加,45天后,细胞对葡萄糖的吸收基本停止。以叶碟法和注射法处理4龄幼虫,8h后幼虫血细胞数量显著降低,随处理时间增加,幼虫血细胞数量又逐渐增加。

摘要: 通过研究血啉甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)对斜纹夜蛾Spodoptera litura(SL)细胞的增殖抑制率IC50、处理后细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)的生成量、细胞内还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平和细胞器超微结构的变化,明确血啉甲醚对SL细胞的氧化损伤,并探讨将血啉甲醚及其衍生物拓展应用到农业害虫防治领域的可行性。用MTT法测定血啉甲醚光照处理下对SL细胞24h和48h的IC50值分别为8.35μg/mL和7.66μg/mL。硫代巴比妥酸(TBA)法测定表明,血啉甲醚光活化后能导致胞内MDA含量明显升高,且MDA的生成量与其浓度呈正相关;当血啉甲醚浓度为50.000μg/mL,光照处理48h时,细胞内MDA生成量达到173.08±3.51nmol/L。5,5′-二硫代双-(2-硝基)苯甲酸(DTNB)法对处理后细胞内GSH水平测定结果表明,光活化后的血啉甲醚处理SL细胞能导致细胞内还原型GSH相对含量随血啉甲醚浓度升高而显著降低;当血啉甲醚浓度为50.000μg/mL,处理48h时,光照处理组细胞内GSH相对含量较之同浓度黑暗处理下降了39.59%。扫描电镜观察显示,6.250μg/mL的HMME处理细胞并光照后,细胞膜表面出现了明显的孔洞,有的细胞出现了花样皱褶和内陷。这些结果表明在血啉甲醚的试验剂量下,SL细胞受到了氧化损伤。

摘要: 天蚕素是昆虫抵御病菌入侵的一类抗菌肽家族。根据斜纹夜蛾Spodoptera litura天蚕素B基因设计特异引物,通过PCR扩增得到2个新的天蚕素基因部分序列,分别命名为cecD1和cecD2(GenBank登录号分别为EF555567和EF555568)。2个基因编码同一个天蚕素D蛋白,该蛋白的成熟肽与天蚕素B存在2个氨基酸残基差异。序列分析发现cecD1和cecD2中分别包含568bp和377bp的内含子序列,它们有相同的5′和3′拼接位点,A+T含量分别为59.7%和69.8%,符合大多数真核生物内含子高A+T含量的特征。