摘要: 水通道蛋白(aquaporin,AQP)是生物体中一种重要的跨膜通道蛋白,它通过一些中性小分子化合物的运输,从而参与了昆虫对食物中水分再吸收、抗寒和抗干燥等重要生理机制。为研究斜纹夜蛾中水通道蛋白的基因特征和时空表达特征,本研究利用同源克隆和RACE技术获得了斜纹夜蛾水通道蛋白1(AQP1)基因的两个转录异构体,并将其分别命名为SL-AQP1A(GenBank登录号:KC999953)和SL-AQP1B(GenBank登录号:KC999954),其中SL-AQP1B比SL-AQP1A在推导的编码区5'端连续性缺失81个碱基,而其他序列完全一致;同源分析显示推导的SL-AQP1与家蚕为代表的水通道蛋白1具有较高的同源性。拓扑学和三级结构模拟显示其有经典的6个全跨膜结构域、2个半跨膜结构域、2个保守的NPA(asparagine-proline-alanine,天冬氨酸-脯氨酸-丙氨酸)结构基序及选择性水孔构件ar/R(aromatic arginine,芳香族精氨酸)。qRT-PCR结果显示,SL-AQP1整体时空表达差异性十分明显,并且SL-AQP1B的表达量显著高于SL-AQP1A;SL-AQP1在卵期和预蛹期有较高的表达量,在中肠、马氏管、血淋巴、消化腺中有相对较高的表达量,暗示其在斜纹夜蛾中存在重要的渗透压调节作用。本文结果为进一步研究水通道蛋白在斜纹夜蛾中的作用提供了一定的分子基础。

摘要: 双酰基肼类杀虫剂模拟天然蜕皮激素作用影响幼虫蜕皮。昆虫蜕皮激素受体的高度敏感性和专一性要求必须建立新的杀虫活性检测技术,以适应快速准确和大批量筛选的要求。本研究采用RT-PCR技术,获取斜纹夜蛾Spodoptera litura蜕皮激素受体(EcR)与超气门蛋白(USP)功能域目的基因,构建EcR、USP功能区基因原核表达载体(pEHISEGFPTEV-EcRcde和pEHISEGFPTEV-USPcde)。载体经诱导表达和蛋白纯化,获得EcR和USP功能区纯化蛋白。在蛋白浓度l mg/mL,3H-PonA终浓度8 nmol/L的条件下,采用放射性配基受体结合分析测定了4种药剂(虫酰肼、呋喃虫酰肼、抑食肼和灭幼脲)不同浓度下的放射性比活的变化。结果显示:随着药剂浓度的逐渐增大,前3种药剂的放射性比活都有不同程度的降低,其中虫酰肼的放射性比活降低程度最大,其次是呋喃虫酰肼和抑食肼,灭幼脲的放射性比活基本无变化。这些结果表明相同条件下虫酰肼比呋喃虫酰肼和抑食肼有更高的杀虫活力,本研究的方法可对双酰基肼类杀虫剂或者先导化合物进行初步筛选。

摘要: 为探明不同波段LED光对毛健夜蛾Brithys crini(Fabricius)行为的影响,在实验条件下观察了4种不同波段(红光:620625nm;绿光:520523nm;蓝色:465467nm;白光:460465nm)LED光源下毛健夜蛾幼虫的假死、爬行、静止、取食、排便、瞭望及其他行为和成虫交配及产卵行为。结果表明:(1)毛健夜蛾幼虫在红光、绿光、蓝光和白光4种LED光源下,爬行、静止和取食行为时间分配差异极显著(爬行、静止和取食:P=0.000),红光组爬行的时间占98.06%,绿光组取食时间占83.65%,蓝光组爬行和静止时间占91.56%,白光组爬行时间占61.16%;爬行、静止、取食、瞭望及其他行为发生率差异显著,红光组和白光组爬行行为发生率最高,分别为47.37%和32.00%,绿光组取食行为发生率最高为40.00%,蓝光组爬行行为发生率最高为32.35%;(2)毛健夜蛾跌落幼虫在4种LED光源下,假死发生率差异不显著,但假死持续时间有显著性差异,红光组假死持续时间显著长于蓝光组和白光组;(3)4种LED光源处理后,交配和未交配的单雌产卵量无显著差异;(4)第1-2天的暗期分别使用4种光源,则交配和产卵高峰均出现在第3天的暗期,而第1-2天的暗期不使用光源,则交配和产卵高峰出现在第1天的暗期。这些研究结果初步揭示了不同波段光源对毛健夜蛾行为影响不同。

摘要: 为了探究进化模型对DNA条形码分类的影响,本研究以雾灵山夜蛾科44个种的标本为材料,获得COI基因序列。使用邻接法(neighbor-joining)、最大简约法(maximum parsimony)、最大似然法(maximum likelihood)以及贝叶斯法(Bayesian inference)构建系统发育树,并且对邻接法的12种模型、最大似然法的7种模型、贝叶斯法的2种模型进行模型成功率的评估。结果表明,邻接法的12种模型成功率相差不大,较稳定;最大似然法及贝叶斯法的不同模型成功率存在明显差异,不稳定;最大简约法不基于模型,成功率比较稳定。邻接法及最大似然法共有6种相同的模型,这6种模型在不同的方法中成功率存在差异。此外,分子数据中存在单个物种仅有一条序列的情况,显著降低了模型成功率,表明在DNA条形码研究中,每个物种需要有多个样本。

摘要: 抗菌肽是一类具有广谱抗菌活性的小分子多肽,包括抗细菌、病毒和真菌。本研究以斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)为研究对象,利用Real-timePCR和半定量RT-PCR检测了其体内两个重要抗菌肽基因Cecropin和Moricin的时空表达模式及其对微生物的敏感性。Real-timePCR检测结果表明,抗菌肽基因Cecropin和Moricin在斜纹夜蛾各个龄期(1,2,3,4,5和6龄幼虫、蛹、成虫)都有表达,随着龄期的增长,表达量逐渐增加,6龄幼虫中表达量达到最高。半定量RT-PCR检测表明,抗菌肽基因Cecropin和Moricin在7个不同组织(气管、卵巢、马氏管、体壁、中肠、脂肪体和血细胞)中都有表达,Cecropin在脂肪体中表达量最高,而Moricin在血细胞中表达量相对较高;RT-PCR检测表明,Cecropin和Moricin的表达在大肠杆菌Escherichia coli诱导后迅速上升,其中诱导后8h达到高峰期,一直持续到48h。不同病原微生物(大肠杆菌E.coli、金黄色葡萄球菌Staphyloccocus aureus和白僵菌Beauveria bassiana)分别诱导后,Real-timePCR检测表明,斜纹夜蛾抗菌肽基因Cecropin和Moricin对大肠杆菌的刺激最为敏感。本研究结果为进一步研究斜纹夜蛾抗菌肽基因Cecropin和Moricin的功能奠定基础。