摘要: 【目的】为了发掘新的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)的资源,在黑龙江省不同地区采集不同类型的土壤样品分离出对夜蛾科具有高毒力的菌株。【方法】采用醋酸钠选择性筛选法筛选Bt菌株,利用10对通用引物对分离株进行基因型分析,SDS-PAGE进行杀虫晶体蛋白分析,同时测定苏云金杆菌分离株对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)、甘蓝夜蛾Mamestra brassicae(Linnaeus)、斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)的杀虫活性。【结果】从黑龙江省不同地区采集的352份不同类型的土壤样品中,共分离出46株苏云金芽孢杆菌野生菌株,出菌率为13.06%。油镜下可观察到伴孢晶体的形态有菱形、球形、镶嵌形及不规则形。结果表明产菱形晶体的菌株多含有cry1类基因,而同时产生菱形、球形及不规则形晶体的菌株则含有多种基因型。SDS-PAGE蛋白分析发现这些菌株主要表达130、90、60 ku蛋白。对其中的部分菌株进行毒力测定,结果表明有4株菌株对3种夜蛾科昆虫具有高毒力。【结论】黑龙江省苏云金芽孢杆菌分布广泛,类型多样,已获得对夜蛾科昆虫有高毒力的菌株,这对夜蛾科害虫的绿色防控及延缓其抗性具有重要意义。

摘要: 【目的】探明毛健夜蛾Brithys crini Fabricius幼虫另类假死行为的规律和特点。【方法】在实验室条件下观察毛健夜蛾幼虫体重、连续刺激、作用力的大小、背景声音和背景LED光色对假死发生率和假死持续时间的影响。【结果】(1)假死持续时间有随幼虫体重增加而延长的趋势,但相关性不显著。(2)假死持续时间有随刺激次数增加而缩短的趋势,与刺激次数呈显著性负相关;前10次刺激的平均假死持续时间(85.6 s)显著长于后10次(67.3 s)。(3)2、5和10 N力处理组间假死持续时间(分别为82.3、97.4和78.3 s)无显著差异,但三者均显著短于6 N力处理组的假死持续时间(157.0 s)。(4)风声处理组假死持续时间(65.6 s)显著短于鸟鸣声和蛙叫声处理组(分别为144.8 s和134.1 s)。(5)不同颜色背景LED光源处理下,假死持续时间有显著差异性,红色闪光、红色、黄色、绿色、白色和蓝色处理组假死持续时间分别为54.7、64.3、82.7、90.6、96.9、112.3 s。各处理假死发生率没有显著性差异。【结论】毛健夜蛾幼虫假死行为可因内外环境因素不同而异。

摘要: 【目的】Asaia属醋酸菌已被证明与双翅目、膜翅目、半翅目和鳞翅目的多种昆虫存在着重要的共生关系。本研究检测斜纹夜蛾Prodenia litura(Fabricius)、粘虫Mythimna separata Walker、小地老虎Agrotis ypsilon Rottemberg和甘蓝夜蛾Mamestra brassicae Linnaeus体内Asaia的感染情况,并研究了Asaia的传递效率。【方法】基于16 s r DNA特异序列检测,分析Asaia在4种鳞翅目害虫中的感染情况。通过建立感染Asaia的斜纹夜蛾品系,检测其垂直传递效率。【结果】Asaia在斜纹夜蛾、粘虫、小地老虎和甘蓝夜蛾田间种群中均有感染,其感染率分别为45.8%、66.7%、47.2%和31.0%。系统发育分析表明,Asaia 16S r DNA序列可分为3种序列型ST1、ST2和ST3,其中4种昆虫中均含有ST1序列型。父母亲本均感染Asaia的斜纹夜蛾后代,Asaia感染率达到91.7%。【结论】Asaia在鳞翅目害虫中存在较高的感染率,在昆虫物种间可能存在水平传递并且在种内可进行垂直传递。

摘要: 【目的】丝氨酸蛋白酶(Serine protease,SP)是以丝氨酸为活性中心的重要的蛋白水解酶。在昆虫中,丝氨酸蛋白酶参与消化、发育、先天免疫反应和组织重建等重要的生理过程。本试验以苜蓿夜蛾Heliothis viriplaca为材料,克隆其丝氨酸蛋白酶基因的cDNA序列,再对该基因进行原核表达并对表达产物进行活性测定研究。【方法】从苜蓿夜蛾中肠中提取总RNA,通过RT-PCR和RACE技术,扩增获得丝氨酸蛋白酶基因cDNA全长序列,用大肠杆菌E.coli表达系统进行表达;再对表达的重组蛋白进行变性、纯化与复性,并以BTEE为底物进行活性测定。【结果】克隆得到的苜蓿夜蛾中肠丝氨酸蛋白酶基因命名为Hv SP,该基因已登录Gen Bank,登录号为KT907053。该基因全长1 017 bp,开放阅读框为886 bp,编码295个氨基酸,分子量约为30.8 ku,等电点为8.27,推导的氨基酸序列与其他昆虫丝氨酸蛋白酶氨基酸序列相似性在46%92%之间。在Tris-HCl缓冲液中,p H为8.5时,复性的重组蛋白活性最高,为28.7 U/m L。荧光定量PCR结果表明,Hv SP基因的m RNA在苜蓿夜蛾的多个组织中特异性表达,且在中肠中表达量最高,但在唾腺中未检测到Hv SP的m RNA表达。【结论】该研究克隆了一个新的苜蓿夜蛾丝氨酸蛋白酶基因的cDNA序列,且原核表达后的重组蛋白经过变性、纯化及复性后具有活性,为进一步探索丝氨酸蛋白酶在昆虫体内的生理生化功能奠定了基础。

摘要: 【目的】测定日龄、性别、交配等因素对农业迁飞性害虫甘蓝夜蛾Mamestra brassicae Linnaeus飞行能力的影响,为其迁飞行为研究和异地测报提供理论依据。【方法】在气温为(24±1)℃、相对湿度为75%±5%的实验室环境下,利用飞行磨系统对甘蓝夜蛾实验室种群15日龄未交配个体、已交配的3日龄个体以及野外迁飞种群分别进行连续24 h吊飞测试,记录其累计飞行时间、累计飞行距离、平均飞行速率等参数。【结果】甘蓝夜蛾实验室种群的飞行能力随日龄增长而变化,初羽化时即具有较强的飞行能力,23日龄达到峰值,45日龄的飞行能力显著下降;雌性甘蓝夜蛾的飞行能力强于雄性甘蓝夜蛾;交配的甘蓝夜蛾平均飞行速率显著小于处女甘蓝夜蛾,但二者的平均飞行时间和飞行距离均无显著差异。此外,渤海湾迁飞种群中晚季节南迁种群的飞行能力显著强于早季节北迁种群和过渡种群。【结论】日龄和交配状态是影响甘蓝夜蛾飞行能力的关键因素。